【参数解读】基因扩增仪(PCR)的技术参数解读与使用

老多_小多

2015/01/06

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PCR

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仪器简介

PCR是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成，它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。目前常用的技术，可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。根据DNA扩增的目的和检测的标准，可以将PCR仪分为普通PCR仪，梯度PCR仪，原位PCR仪，实时荧光定量PCR仪四类。

PCR技术原理

该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。在适宜的温度和环境下，DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3´-OH末端，并以此为起始点，沿模板5´→3´方向延伸，合成一条新的DNA互补链。

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列举部分仪器的个别参数，仅供参考：
技术参数：

样品台容量:	96X0.2ml PCR管、 96孔PCR板、8排/12排PCR管
工作原理：	TE半导体系加热致冷技术
屏幕：	彩色触摸屏（5.7英寸）
温度控制范围：	4℃-105℃
升降温速度：	≥4.0℃/秒
温度均匀性：	≤0.3℃
温控精度：	≤0.1℃ (@55℃) / ≤0.2℃(@90℃以上)
温度显示精度：	0.1℃
程序温控方式：	Block模式和Tube模式
变温速度可调范围：	0.1-4.0℃
程序可储存数：	最大可存250个程序，可通过U盘扩展存贮
最大循环数：	99循环，可套嵌两级，可做巢式PCR实验
时间递增/递减：	0-9分59秒，可做Long PCR实验
温度递增/递减：	0.1-9.9℃，可做Touch down实验
断电保护/暂停功能：	有
Soak功能：	有
运行状态显示功能：	有，图文显示模式
梯度温度设置范围：	30-105℃
梯度温差范围：	1-30℃
热盖温度范围：	30-110℃
热盖高度：	高度、压力可调，适应各种不同品牌耗材
智能热盖功能：	模块温度与热盖温度联动设置，保护样本及仪器

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请您来解析：

1、普通PCR仪，梯度PCR仪，原位PCR仪，实时荧光定量PCR仪四类仪器有何异同？

2、我们应该如何根据检测需求来选购PCR的四类仪器？

3、PCR的核心参数都有哪些？

4、梯度PCR仪可以分离不同DNA的片段吗？与普通PCR的异同在哪？

欢迎大家参与讨论，补充自己想交流的参数，说说自己的认识或者提出自己的疑问！！！

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