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Ultimate XB-C18的应用----大豆异黄酮含量的测定

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  • 大豆异黄酮是一种植物性雌激素,又称为植物动情激素,是一种天然荷尔蒙,被认为有防癌丰胸之效,目前几乎没有明显副作用的报告。这个东西可防治一些和雌激素水平下降有关的疾病,延缓女性衰老、改善更年期症状、骨质疏松、血脂升高、乳腺癌、前列腺癌、心脏病、疏松症、心血管疾病等。对于高雌激素水平者,表现为抗激素活性,可防治乳腺、子宫内膜、结肠、前列腺、肺、皮肤等癌细胞的生长和白血病,及其它心血管疾病。其性状为:浅黄色粉末,气味微苦,略有涩味。来源于大豆类植物的胚芽,主要成分有:大豆甙(Daidzin),大豆甙元(Daidzein),染料木甙(Genistin),染料木素(Genistein),黄豆黄素(Glycitin),黄豆黄素甙元(Glycitein)。
    1 材料与方法
    1. 1 仪器与试剂
    1. 1. 1 仪器Waters2695高效液相色谱仪,配有二极管阵列检测器和Empower 色谱工作站; 脱气泵( 美国Millipore 公司) ; 超纯水系统( 美国Millipore公司) ; CW - 2000 超声波萃取仪(上海) 。
    1. 1. 2 试剂大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素对照品由美国Sigma 公司生产; 甲醇为色谱纯( 美国Fisher 公司) ; 乙醇、丙酮均为分析纯( 天津市科密欧化学试剂有限公司) ,磷酸为优级纯( 天津市化学试剂三厂) ; 实验用水为超纯水。
    1. 2 方法
    1. 2. 1 色谱条件
    色谱柱:Ultimate XB-C18 4.60×250mm,5 um .PartNumber 00201-31043Serial Number 211302350.检测器: 二极管阵列。检测波长: 254 nm。流动相: 1% 磷酸水溶液和甲醇采用梯度洗脱,洗脱程序如下: 0 ~ 4 min,70% 磷酸水溶液+30%甲醇; 14 ~ 24 min, 45% 磷酸水溶液+55% 甲醇; 25~ 30 min,70% 磷酸水溶液+ 30% 甲醇。柱流速: 1. 0 ml /min。柱温: 30℃。进样量: 10μl。
    1. 2. 2 标准曲线制作
    1. 2. 2. 1 标准溶液配制 单标标准储备液配制: 准确称取大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、染料木素和大豆黄素对照品各0. 0500 g,分别置于小烧杯中,加70%乙醇溶解,如果不好溶解,可以在超声波中超声加速溶解,或者加入少量丙酮也可以加速溶解,待溶解完全后,移入50 ml 容量瓶中,加70% 乙醇定容至刻度,混匀,此溶液作为单标储备液,浓度各为1. 0 mg /ml。混合标准储备液配制: 准确吸取大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、染料木素和大豆黄素单标储备液各5. 0 ml 于50 ml 容量瓶中,加70%乙醇定容至刻度,混匀,此混标溶液6 种成分浓度各为100 μg /ml。
    1. 2. 2. 2 标准工作曲线制备 准确吸取混合标准储备液2. 0、4. 0、6. 0、8. 0、10. 0、12. 0 ml 分别于100ml 容量瓶中,加70%乙醇定容至刻度,混匀,6种成分的浓度各为2. 0、4. 0、6. 0、8. 0、10. 0、12. 0 μg /ml,按1. 2.1 色谱条件进行测定; 以各组分浓度为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准工作曲线,得回归方程。
    1. 2. 3 样品测定
    1. 2. 3. 1 样品前处理 固体样品: 准确称取2. 0 g样品于100ml 容量瓶中,加入50 ml 70% 乙醇超声波提取30min,加70%乙醇定容至刻度,混匀, 0. 45μm 滤膜过滤后,供高效液相色谱测定用。液体样品: 准确吸取5. 0 ml 样品于100 ml 容量瓶中,加70%乙醇定容至刻度,混匀,0.45 μm滤膜过滤后,供高效液相色谱测定用。

    1. 2. 3. 2 样品测定 吸取样品处理液及标准溶液各10 μl,按1. 2. 1 色谱条件进行测定,以标准保留时间定性,峰面积外标法与标准系列比较定量。
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  • 会师楼

    第1楼2015/04/16

    2 结果
    2. 1 标准线性实验结果及标准色谱图 大豆苷、染料木素、染料木苷、大豆素、大豆黄苷和大豆黄素标准线性实验结果及标准曲线分别见表1 和图1,由结果可以看出6 种组分浓度与峰面积在2. 0 ~ 12. 0μg /ml 之间,均呈良好的线性关系。标准色谱图见图2。
    2. 2 精密度实验 配制6 个不同浓度的混标标准溶液,每个浓度测定6 次,其RSD 值分别为: 大豆苷0. 46% ~ 2. 48%、大豆黄素0. 59% ~ 2. 10%、染料木苷0. 48% ~ 1. 72%、大豆素0. 65% ~ 2. 36%、大豆黄苷0. 66% ~ 2. 96%、染料木素0. 47% ~3. 33%。见表2 。
    2. 3 回收率实验 本方法采用加标回收的方法进行准确度的评价。精密称取已知含量的样品,分别加入一定量的对照品溶液,按上述样品测定方法进行测定,计算回收率。本实验选取2. 0、4. 0、8. 0 μg /ml 3 个加标水平,结果大豆苷、大豆黄素、染料木苷、大豆素、大豆黄苷和染料木素的回收率分别在98. 0% ~ 101. 0% 、98. 5% ~ 102. 0%、98. 8% ~105. 0%、97. 5% ~ 101. 0%、99. 1% ~ 102. 0%、99. 2% ~ 102. 0%之间。见表3。



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  • 会师楼

    第2楼2015/04/16

    2. 4 方法检出限 配制一低浓度混标,按上述色谱条件平行测定7 次,得一组低浓度标准峰面积,求出其标准偏差,3倍标准偏差除以方法的灵敏度,即得方法的最低检出浓度,分别为: 大豆苷0. 60 μg /ml,大豆黄素0. 57 μg /ml,染料木苷0. 26 μg /ml,大豆素0. 28 μg /ml,大豆黄苷0. 55 μg /ml,染料木素0. 27 μg /ml。
    2. 5 改进方法与国标方法测定结果比较 取3 份含有大豆异黄酮的保健食品采用改进方法和国标方法同时测定,其测定结果平均值见表4。
    2. 6 干扰试验 目前保健食品中功效成分比较多,能用高效液相色谱测定的成分也很多,在此色谱条件下有可能对测定目标物质产生干扰的成分也不少,但不可能对所有成分都进行干扰试验。根据近几年来对保健食品功效成分的测定,笔者认为这类保健食品中可能含有葛根素,因此在此色谱条件下对葛根素进行了干扰试验,结果显示,葛根素对目标物质不产生干扰,见图3。由此可知应用此方法也可以同时测定葛根素含量。


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  • 东风恶

    第4楼2015/04/17

    强烈支持,不错的原创。

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  • dahua1981

    第5楼2015/04/20

    应助达人

    好久没有原创了,支持一下

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  • mingming

    第6楼2015/04/28

    确实写的不错啊

    暗夜精灵(jbcng) 发表:支持一下

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  • mingming

    第7楼2015/04/28

    东风恶(luoleqc) 发表:强烈支持,不错的原创。

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  • 东风恶

    第8楼2015/04/30

    很赞!

    mingming(cuidahua) 发表:

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  • xue2009

    第9楼2015/05/05

    老师,补充一下标准品的谱图和结果表及样品的谱图和结果表原创就更加完美哦!

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  • 飞哥儿

    第10楼2015/05/05

    很好,有参考价值。
    请问 月旭色谱柱分国产、原装进口的么?

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