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液质联用(LCMS)
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优秀的液相操作必须知道的四点(二)
微信Lab_Map
2015/10/31
私聊
液质联用(LCMS)
2015-10-25
微信:Lab_Map
[div]
上期讨论了压力问题和保留时间问题,这期你将会看到关于各种峰形问题的讨论,另外也会分享一些
液相
操作中好的操作习惯(Best practices)
[/div]
3.峰形问题
理论的峰形是高斯峰形,但在实际测试中,峰都会有点拖尾。当峰形严重变形时,就意味某些地方出现了问题,需要去调整。我们经常遇到的峰形问题有:部分峰拖尾,前伸和所有的峰拖尾这三种情况,哪么如何解决呢?在开始之前先看一下如何计算峰的对称性
1
计算峰的对称性
计算峰的对称性的方式有两种:拖尾因子(Tailing fact)和对称因子(Asymmetry factor)
拖尾因子是美国药典规定用于评价峰形对称性的一个参数,其计算公式为 Tf =(A+B)/ 2A。拖尾因子的计算公式中 A 和 B 的数值如图 1 所示,从色谱峰的顶点作一条直线与基线垂直,再于峰高 5% 处作一条与基线平行的直线,与垂线相交于点 o,与峰的两边分别相交于点 a 和 b,以 A 表示 oa 的长度,以 B 表示 ob 的长度。
不对称因子的概念与拖尾因子接近,二者的区别主要有两个:1) 计算公式不同 As=B/A;
2)用于计算的 A 和 B 的取值方位不同,不对称因子是以峰高 10% 处来计算的。图 1 可清楚的说明它们之间的相互关系。
如 Figure2所示:正常的 TF的范围是 0.9
2
只有一个峰或者部分峰拖尾
出现这种情况,很有可能是系统中某些化学特性发生了改变。
首先去check 流动相,流动相的pH或缓冲盐浓度的改变都会影响到峰形,此时伴随的可能还有保留时间的变化。
更换了新的流动相 ,如果问题已经存在 ,哪么就要去check你的柱子,如果使用了保护柱,就先更换新的保护柱,然后再更换新的柱子
3
峰前伸(peak fronting)
峰前伸的情况很少遇到,之前在《柱过载 or 检测器过载》中提到过柱过载会造成峰前伸,伴随的还有保留时间的提前
另外一个可能造成峰前伸的原因是柱子塌陷,如figure 4所示 ,第527针进样峰形是正常的,但在第528针进样峰形严重前伸 ,柱子要求的使用条件是 ph ≤ 7 and ≤ 40°C.,而实际使用的 ph ≤ 9.6 and ≤ 70°C.,如此恶劣的条件会慢慢的溶解柱子的固定相,最终造成柱子固定相的塌陷。
3
所有峰拖尾
如图5所示,出现这种情况极有可能是柱子的inlet 堵塞,试着去反冲柱子看是否能够解决问题,如果不行,就要更换新的柱子 。
如果出现了这种情况,要去check一下所用的流动相和样品,找出柱子堵塞的原因。
4.Best Practices
好的操作习惯可以总结为三点:
Degassing(脱气),Filter(过滤),Flush(冲洗)
使用HPLC级的试剂
定期的clean 溶剂过滤头和针座吗,flush柱子,保持系统的清洁
样品一定要用正确规格的滤头过滤
务必运行试剂空白,试剂空白的基线和出峰能够很好的反映出当前系统的状态
每个方法固定使用一根柱子
导语
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私聊
tx7236
第1楼
2015/10/31
谢谢楼主分享~
0
发表回复
+关注
私聊
ie4680180
第2楼
2015/11/02
应助达人
可惜图像显示不了。呵呵
0
发表回复
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