在反相模式下进行分析时,为增强目标化合物的保留,通常将流动相中的水相比例提高;或者使流动相条件不变,而将色谱柱更换为含碳量更高的C18色谱柱进行分析,由于其疏水性相互作用强,对于目标物质的保留也会增强。本次我们选择对于含有极性官能团化合物具有良好保留行为的几款色谱柱进行比较。
图1为分别使用CAPCELL PAK ADME S5、他社ODS A色谱柱以及含碳量较高的他社ODS B色谱柱,对10种标准物质进行分析所得色谱图。同时附上从该图中所得参数(疏水性和表面极性参数的获得方法可参考《LC Café espresso No.2016003——CAPCELL PAK ADME和ODS色谱柱溶出行为的比较》)。
图1 对10种标准物质的分析色谱图
【HPLC Conditions】
Column size : 2.0 or 2.1 mm i.d. x 150 mm
Mobile phase : H2O / CH3OH = 50 / 50
Flow rate : 0.2 mL/min
Temperature : 40 ˚C
Detection : UV 254 nm
Inj. vol. : 1 μL
如图1,从整体来看,与其他2款色谱柱相比,含碳量较高的他社ODS B色谱柱保留能力最强,特别是对苯、甲苯和萘这样的疏水性化合物的保留能力要强很多;但另一方面,对于具有极性官能团的苯甲酸甲酯、苯酚和咖啡因等化合物的保留未见明显增强。
而CAPCELL PAK ADME S5色谱柱与他社2款色谱柱相比,苯甲酸甲酯和苯的溶出顺序发生了逆转,同时,对于具有极性基团的苯甲酸甲酯的保留也更强。
这些色谱柱的溶出行为可以结合图1中所示各色谱柱的疏水性及表面极性参数来进行说明。其中,高含碳量色谱柱——他社ODS B色谱柱的疏水性参数最大,对疏水性化合物的保留能力很强,而表面极性参数最大的CAPCELL PAK ADME S5色谱柱,对于具有极性官能团的化合物的保留能力较强;同时,即使ADME色谱柱的疏水性参数比他社ODS A柱小,但二者对疏水性化合物的保留能力在同等水平,这是由于色谱柱疏水性与表面极性相互作用的影响。
如图2,对CAPCELL PAK ADME 色谱柱对极性化合物的保留行为进行考察,选择含2个羟基的高极性化合物二乙醇亚硝胺作为样品进行分析。
图2 各色谱柱对二乙醇亚硝胺的分析色谱图
【 HPLC Conditions 】
Column size : 2.0 or 2.1 mm i.d. x 150 mm
Mobile phase : 10 mmol/L HCOONH4 (pH 6.2) / CH3OH = 98 / 2
Flow rate : 0.2 mL/min
Temperature : 40 ˚C
Detection : UV 254 nm
Inj. vol. : 5 μL
Sample dissolved in : H2O (1 ppm)
如图2, CAPCELL PAK ADME S5色谱柱对二乙醇亚硝胺的保留最强,由此可知,对于极性化合物的保留不仅考验色谱柱的疏水性,表面极性参数更是一个重要因素。