以2015版中国药典中黄曲霉毒素测定法讨论样品前处理中滤膜的选择

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2016/07/02

私聊

前处理综合讨论

摘要： 本文以黄曲霉毒素的测定方法为例讨论了样品前处理中滤膜选择时需要考虑的因素，目标物应能够完全通过滤膜而不被吸附，滤膜不受溶液影响或者滤膜的溶出对分析的影响可以忽略。
滤膜过滤是液相色谱分析中常用的操作方式，过滤可以过滤掉大于滤膜孔径的颗粒，同时也可以对乳状液进行破乳。目前的标准方法前处理都采用用微孔滤膜来进行进样前的过滤，然而滤膜分不同的材质、孔径和大小，孔径和大小一般可以根据使用色谱柱来确定，而材质的确定往往不是那么容易，因此基于2015版中国药典中黄曲霉毒素测定方法，本文选择针式过滤器来讨论前处理中如何选择材质合适的滤膜。

1 仪器、试剂与材料
Waters超高效液相色谱仪，Premier XE三重四级杆串联质谱仪，Masslynx工作站（美国Waters公司）；PES针式过滤器滤膜（孔径0.2 μm）；尼龙针式过滤器滤膜（孔径0.2 μm）。
黄曲霉毒素（美国Supelco公司）；甲醇、乙酸铵、甲酸均为色谱纯；实验用水为超纯水，电阻率18.0 MΩ·cm。
2 实验过程
模拟黄曲霉毒素检测时上样的溶液，配制溶液浓度分别为1 μg/L、5 μg/L、10 μg/L的和 21%甲醇水溶液。
分别采用尼龙滤膜和水相PES滤膜过滤配制好的标准品溶液，过滤后的溶液和未经过滤的标准品溶液同时上机测试，对四种黄曲霉毒素的峰面积进行积分比较。
3 结果与讨论
3.1 滤膜溶出的考察
不同材质滤膜对不同溶剂的耐受性不同，一般的滤膜材质可以到滤膜对不同溶剂的耐受情况，一款对溶剂耐受性差的滤膜可能会溶解滤膜，导致滤膜破损从而失去过滤的效果，在使用滤膜过滤溶液之前，需要考察滤膜溶出的影响。
2015版中国药典中黄曲霉毒素提取溶剂为70%甲醇溶液，由于70%的溶液经过免疫亲和柱时不能保留黄曲霉素毒，因此需要取提取溶液15 mL用水稀释至50 mL（此时溶液中甲醇的体积百分比为21%），由于部分共提取物在21%甲醇溶液的溶解度小于70%甲醇溶液的溶解度而析出，因此在上免疫亲和柱之前需要去除析出的杂质。
比较了21%甲醇/水溶液过膜与不过膜的质谱背景，在全扫描模式下进行全扫描，图1分别为20%甲醇水溶液不过膜、过PES膜、过尼龙膜的质谱全扫描图，可以看到不过膜的色谱图仅仅是梯度洗脱基线，过PES膜的谱图中在2.18min出有一个溶出峰，而过尼龙滤膜的谱图在2-4min内有若干溶出峰。可见从滤膜溶出的角度，PES膜的影响比尼龙滤膜的影响要小，但由于后期还要进行净化，而且从过程空白中可以看到，滤膜材质溶出对目标物影响可以忽略。

图 1

3.2不同滤膜的回收率数据

表1 不同滤膜得到的回收率

浓度		B₁	B₂	G₁	G₂
1 μg/L	不过滤膜	100%	100%	100%	100%
	过PES滤膜	97%	94%	95%	95%
	过尼龙滤膜	58%	69%	77%	87%
5 μg/L	不过滤膜	100%	100%	100%	100%
	过PES滤膜	99%	96%	94%	98%
	过尼龙滤膜	65%	75%	83%	93%
10 μg/L	不过滤膜	100%	100%	100%	100%
	过PES滤膜	97%	92%	96%	90%
	过尼龙滤膜	63%	74%	82%	80%

通过比较可以看出，以B₁低浓度的标准品收到的影响比高浓度收到的影响大，应该是随着浓度的升高滤膜对B₁的吸附达到一定比例后就不再吸附。
四种黄曲霉毒素中受滤膜影响的大小依次为 B₁>B₂>G₁>G₂，这和四种化合物的非极性顺利正好相反，在反相色谱中四种黄曲霉的出峰顺序依次为G₂、G₁、B₂、B₁，因此在讨论滤膜的选择时，除了需要溶剂外，还需要讨论目标物的，其本质是目标物在溶剂和滤膜上的分配不同。
4小结
从实验数据可以看出，采用不同材质的滤膜对结果的影响较大，在方法建立时有必要进行比较以获得更好适合的滤膜。

以2015版中国药典中黄曲霉毒素测定法讨论 样品前处理中滤膜的选择

以2015版中国药典中黄曲霉毒素测定法讨论样品前处理中滤膜的选择