双胍类化合物二甲双胍、丁双胍和苯乙双胍被用于治疗糖尿病,是具有强碱性和强极性的离子性化合物。
这些化合物在常规C18色谱柱上很难得到保留,因此我们考虑在强阳离子交换模式下,使用CAPCELL PAK SCX UG80色谱柱对其进行保留与分离,并且尝试缩短分析时间。使用短柱长的CAPCELL PAK SCX UG80色谱柱(2.0 mm i.d. x 20 mm)对3种双胍类化合物进行分析,结果如图1。
在强阳离子交换模式下进行的分析,通过调节流动相pH值和盐浓度均可对化合物的保留行为进行调整,其中盐浓度是影响保留强弱的主要因素。如图1所示,随着盐浓度的提高,虽然各化合物的保留逐渐变弱,但在短时间内得到了3个成分的分离;在20mmol/L甲酸铵/乙腈=60/40流动相条件下,将流速提升3倍(即600μL/min)可将分析时间缩短至4分钟以内,且20mmol/L的低盐浓度也适用于质谱分析。
【参考】
除了强阳离子交换模式下之外,我们还尝试在反相模式和亲水性相互作用的HILIC模式下进行分析。反相柱分别选择了柱长相同的C18色谱柱和键合金刚烷基的ADME色谱柱。虽然在反相模式下,ADME比C18柱保留能力强,但对二甲双胍的保留较其他两种模式较弱。假如您关注的是二甲双胍的保留,那么除了强阳离子交换模式外,在HILIC模式下亦能得到对二甲双胍的良好保留。由于分离模式不同,流动相中的有机相比例亦有所差别,因此请根据所分析样品的性质来选择最适合的分离模式。