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化学药HPLC分析方法开发---苯环间位和对位取代

牛一牛

2016/09/29

化学药检测

原创大赛已经接近尾声了，作为一个论坛老人，还是唠叨几点吧。
HPLC，分析行业比较关键的仪器分析，做化学药的，拿到结构式，可能无从下手，不知道分析方法该如何开发，这个也是很久之前自己比较纠结的问题。在此，举一个比较有代表性的简单实例，跟大家分享一下。

这个化合物在药物合成中作为起始反应物或中间体很常见，Br的对位和间位取代都反应结果至关重要。
间位取代和对位取代化学性质比较相近，HPLC分析方法如何开发？
对于新人来说，比较有挑战性，但是对于老手，相信多数人心中已经有答案了。
首先，了解化合物的化学性质，包括物理溶解性。从结构上看，该化合物偏酸性，溶于甲醇、乙腈等常见试剂，这些最关键的性质决定方法开发的难易。
偏酸性，流动相体系要保证酸性，可以尝试最简单的酸性体系，如0.1%TFA，PH大约在1.93左右。
由于有-COOH，在甲醇体系中可能会发生酯化反应，优先选择乙腈体系。
最大波长吸收，有苯环结构，在210和254nm之间一定有吸收，做一个波长扫描，经过扫描，最大吸收在220nm。
经过上述分析流动相体系和检测波长定下来了。
接下来是选择色谱柱。色谱柱可长可短，可根据自己需要调整，一般先以手头上现有的色谱柱为选择依据，以Xbridge，C18的短柱为例。
上述基本关键参数定了后，就可以尝试开发方法了。
先配制含有间位取代和对位取代的化合物混合溶液，保证在方法中能分离开。
流速和柱温、进样量按基本设定就可以了，一般1.0和25℃。进样量选择10μl。
梯度1：

先运行一个梯度，考察基本的分离情况，及峰形。按上面梯度，间位和对位的分离度只有1.52，方法有待优化。如下图：

大方向定了，在此梯度基础上，可以尝试调整，经过几个梯度调整，下面这个梯度比较合适：

结果如下图：

从整体上看，该方法作为定量分析可行，接下来做一系列的方法验证，即可作为该化合物对位取代和间位取代的质控分析方法。
上述是工作中很简单的一个化学物的方法开发，实际工作中，遇到的更多比较复杂的结构，基本原则就那么几点，工作积累久了，拿到化合物，感觉就上来了。
国庆前夕，分享一下，希望对新手有所帮助。

精
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分
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浪淘沙隐

第1楼2016/09/30

新手学习方法开发的一个非常好的科普文章。

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牛一牛

第2楼2016/10/02

应助达人

呵呵，身为论坛老人，总要多几句嘴！
浪淘沙隐(zhoujin83)发表:新手学习方法开发的一个非常好的科普文章。

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阿du

第3楼2016/10/11

喜欢这种举实例的经验分享，开发思路和注意事项贯穿其中，由点及面，可以给大家很多的帮助和启发，赞一个。

1

牛一牛

第4楼2016/10/12

应助达人

分析研究员的工作常态！
阿du(duliuhui)发表:喜欢这种举实例的经验分享，开发思路和注意事项贯穿其中，由点及面，可以给大家很多的帮助和启发，赞一个。

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m3151041

第5楼2016/10/17

好

1

青林

第6楼2016/10/21

内容不错，学习学习

1

lijing320323

第7楼2016/12/05

同分异构体很难分离

0

牛一牛

第8楼2016/12/05

应助达人

极性还是有区别的
lijing320323(lijing320323) 发表:同分异构体很难分离

0

harry0314

第9楼2017/07/22

感谢楼主分享

0

zimeng3211

第10楼2017/08/01

真的很具有代表性，需要这样的文章。

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