色谱图显示效率低下（塔板数）的原因是什么？

Kromasil鲲霆

2017/09/07

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注射进样量/注射进样体积
样品质量或体积过载和使用错误的样品溶剂都会造成色谱柱性能的显著降低，由此损害分离效果。注射进样体积不得超过流速的10%（比如，在流速为1毫升/分钟时，注射进样体积<100微升）。样品进样量高出吸附等温线的线性部分就意味着上样量过载。这条分界线不一而足，原则上，每毫升柱体积上不得承载超过0.01毫克的样品（比如，在4.6 X 250 毫米色谱柱上最大上样量为22微克）。如果因为检测精度需要，上样量还是可以再上调。样品溶剂内的强移动相组分（反相模式下脂肪醇、乙腈，或者正相模式下脂肪醇、乙酸乙酯等）含量不得超过它们在工作移动相中的浓度。
额外柱体积/死体积
塔板数低下的原因通常是因为死体积过大。死体积是一下这些部分工作体积的总和，样品注射器，包括样品环，连接注射器和色谱柱的导管，连接色谱柱和贯流分析池的导管，贯流分析池，再加上配件、接头和线程内滤膜所产生的空间。内径为0.010”的导管在高效液相色谱系统中最常见。如果使用钻孔更细（内径<3.0毫米）的色谱柱，可以将内径为0.010”的导管更换成内径为0.007”的导管以减少死体积，从而提高色谱性能。使用内径为0.005”的导管可以进一步减少死体积，但就是操作上不太方便。使用内径小于0.007”的导管对流速有所限制，当缓冲盐分沉淀析出时会带来麻烦。如果您正使用多种品牌的高效液相色谱柱，请确认用以连接色谱柱的配件是否刚好配套。如果您的色谱系统使用的是不锈钢导管和配件，在连接色谱柱前，请在核对色谱柱的品牌后选择正确的配件并预先装配好。如果您的色谱系统使用的是聚醚醚酮材料的导管和配件，比较理想的方式是在每次更换色谱柱的时候，选择在新切下的聚醚醚酮导管上安装全新的聚醚醚酮配件，以确保它们之间完美匹配。