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大曹色谱液相豆丁帖之保留时间不稳怎么办？

capcellpak

2018/07/13

大曹色谱液相豆丁帖
——保留时间篇

为啥保留时间总是挪来挪去？
为啥保留时间总是跳来跳去？
YoYo又来答疑解惑啦~开心不❤

保留时间不稳定主要是由于液相系统 or 液相方法两方面所导致~
下面就让YoYo来给大家说道说道~
关于【仪器系统问题】

检查是否存在管线漏液
→ 检查仪器所有管线接口处，特别是色谱柱两端螺丝是否完全拧紧
检查是否泵中混入气泡
→ 检查压力波动，将流动相重新脱气并进行purge操作
检查是否泵供液不准
→ 分享一个判断泵供液准确性的小窍门：
将系统流速设为1 mL/min，手机or秒表计时1 min，确认1 min时间段出口流出液体体积是否为1 mL，即可判断泵是否准确供液~
关于【液相方法问题】

色谱柱及流动相温度
→ 建议使用柱温箱，保证柱温稳定
→ 保证室温恒定，即流动相温度恒定
充分平衡
→ 使用离子交换色谱柱或使用离子对试剂时，平衡时间不足将导致保留时间漂移，建议使用离子交换模式进行分析时，对色谱柱进行过夜充分平衡
流动相pH值
→ 离子型化合物可能由于流动相pH设定不合理而漂移，建议流动相pH设定在pKa±2以上范围

洗脱方法
→ 复杂样品建议使用梯度条件分析，杂质的不完全洗脱可能导致主峰出峰时间变化
事例：
离子交换柱分析由于平衡不够导致的出峰时间漂移
解决方案：
加长平衡时间，可使用流动相小流速平衡过夜

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