流动相混合方式对苦参碱及氧化苦参碱出峰影响

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2019/07/04
河南科高中标检测技术团队

私聊

中药/天然药检测

流动相混合方式对苦参碱及氧化苦参碱出峰影响
1. 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱Agilent ZORBAX NH₂(Agilent ZORBAX SB C18)；以乙腈-异丙醇- 3 % 磷酸溶液（80 ：5 : 15)为流动相；检测波长为210nm。理论板数按氧化苦参碱峰计算应不低于4000。
2. 对照品溶液的制备
取苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品适量，精密称定，加流动相分别制成苦参碱94.74 μg/ml，氧化苦参碱156.65μg/ml的混合溶液，即得。
3. 供试品溶液制备
取本品粉末（过三号筛）约0. 3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液0. 5ml，精密加入三氯甲烷20ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率33k Hz)30分钟，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，加在中性氧化铝柱 (100〜200目，5g，内径 1 cm )上，依次以三氯甲烷、三氯甲烷 -甲醇（7 : 3)混合溶液各20ml洗脱，合并收集洗脱液，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇适量使溶解，转移至10ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，即得。
4. 样品分析
依次将混合对照品溶液和供试品溶液进样10 μL，记录苦参碱、氧化苦参碱保留时间及峰面积。
5. 结果
5.1 以乙腈（A)-异丙醇(B)- 3 % 磷酸溶液(C)三相流动相泵前混合
混合对照品溶液及供试品溶液色谱图分别见图1、图2.

图1 对照品溶液色谱图

图2 供试品溶液色谱图
5.2 以乙腈-异丙醇-3%磷酸溶液（80:5:15)混合溶液为流动相
分别将乙腈、异丙醇、3%磷酸溶液过膜，之后将乙腈-异丙醇-3%磷酸溶液按照药典比例混合均匀于同一流动相瓶中，超声脱气，在线脱气。混合对照品溶液及供试品溶液色谱图见图3、图4。

图3对照品溶液色谱图

图4 供试品溶液色谱图
6 讨论
以乙腈（A)-异丙醇(B)- 3 %磷酸溶液(C)三相流动相在四元泵上泵前混合，或者以乙腈为流动相A、异丙醇-3%磷酸溶液（5:15）为流动相B二元高压泵上泵后混合，对照品溶液和供试品溶液苦参碱、氧化苦参碱出峰异常，见图1、图2。只有预先将乙腈-异丙醇-3%磷酸溶液按照药典（80:5:15)比例预先混合均匀，脱气，对供试品溶液及对照品溶液梯度洗脱，苦参碱和氧化苦参碱出峰正常，见图3、图4。