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柱层析色谱分离问题，求救！

wujian0205

2019/07/05

其他色谱仪综合讨论

我在做柱色谱分析实验时，所用填料为硅胶（100-200目）2.5g，洗脱剂为（1）乙酸乙酯：甲醇=1:1，（2）甲醇，先用1系统20ml淋洗,再用2系统80ml淋洗，收集2系统洗脱液，但是最后结果都是2系统中所要成分大部分都在1系统的洗脱液中，但有时又能收集到合格的2系统洗脱液，造成结果很难重现。因为是注册的方法，没办法变操作大步骤，希望有人能指导一下层析柱的操作注意事项。
我正常的操作：①装柱子是用1系统浸润硅胶，湿法装柱，装的过程中会敲打或将柱子在台面上墩实、并使之平整。 ②然后用1-2ml 1系统液体溶解样品上样（尽量2-3次溶完样品洗进柱子），③再之后就是先把样放到柱子里，④再加1系统洗脱液20ml,洗脱，没有过多控制流速，因为流速已经很慢了（1秒1-0.5滴）。⑤流完1系统洗脱液至近干（弃去），缓慢小心加入80ml 2系统洗脱液（怕冲坏柱子），然后收集流出液。。。。
不知道有什么不妥的地方，请各位老师交流指正。

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