1(正相色谱)+1(反相色谱)=2(HILIC模式)？

月旭

2019/09/25

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小伙伴们，在做反相液相色谱模式时，有没有发现强极性化合物（如多糖类、生物碱类、寡糖类等）的保留很弱，甚至没有保留。一些碱性的药物分子的分离效果也不理想，亲水性强且不带任何电荷的溶质在反相液相色谱或者离子交换色谱中均不被保留，这些给我们的实验造成了很大的挑战。这种情况下，亲水作用色谱（HILIC）是一种很好的选择。
HILIC是正相色谱的变化，与反相色谱相反，流动相中的水相部分是较强的洗脱剂，而有机部分则是很弱的洗脱剂。也就是说，增加有机相的比例会使得保留增强。
基于此月旭科技成功推出了一种两性离子键合的全多孔球形硅胶HILIC色谱柱，其两性离子（amphion）是指在一个分子中同时存在正电荷中心和负电荷中心。该色谱柱具有良好的亲水性，适合分离极性、亲水性的小分子目标物以及碱性药物分子。与传统的硅胶和氨基柱等HILIC色谱柱相比，其可提供更好的重现性和更为稳定的HILIC模式分离能力。
Ultimate® HILIC Amphion色谱柱的特点
🔸同时与阴、阳离子产生弱静电作用，对目标物具有不同选择性；
🔸提供氢键、分子以及静电引力的多重作用；
🔸能为强极性的目标物提供合适的保留；
🔸采用水溶性有机相作为流动相，能够显著改善样品在流动相中的溶解度；
🔸分离极性、亲水性的小分子目标物以及碱性药物分子。
行文至此，太多的理论皆是空洞，那就用两个分离案例来展现这款柱子独特的分离选择性吧。
🔷四种杂质的分离（5-氮杂胞嘧啶、二氰二胺、三聚氰胺、三聚氰酸二氢铵）：
色谱条件
色谱柱：
Ultimate® HILIC SiO2（5μm，4.6x250mm)
Ultimate® HILIC Amphion　Ⅱ（5μm，4.6x250mm）
流动相：乙腈-水（80：20）
检测波长：240nm
柱温：30°C
流速：1.0ml/min
进样量：10μl
Ultimate® HILIC SiO2混合对照图

Ultimate® HILIC Amphion　Ⅱ混合对照图

从上面的数据可以看到：HILIC模式下Ultimate® HILIC Amphion　Ⅱ色谱柱比Ultimate® HILIC SiO2保留更强，具有明显的选择性差异。
🔷三种脂肪酸氨基酸（亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸）的分离
色谱条件
色谱柱：
Ultimate® HILIC Amphion　Ⅱ（5μm，4.6x150mm）
流动相：乙腈-水（70：30）
检测波长：206nm
柱温：30°C
流速：0.5ml/min
进样量：5μl
对照溶液色谱图

从上面的数据可以看出，使用Ultimate® HILIC　Amphion　Ⅱ（5μm，4.6*150mm）色谱柱检测亮氨酸、丙氨酸和甘氨酸，分离度满足要求。
HILIC Amphion 是基于正相和反相色谱上的一种独特的分离模式，决定了其独特的选择分离性，同样地，也会带给您独特的体验。