说说微生物能力验证那点事——提供者篇（未经许可禁止转载本文中任何内容）
近年来随着评审准则不断地更新，评审专家要求越来越严苛，实验室扩项越来越频繁，能力验证活动已成为认可实验室不可或缺的质量评价活动。作为实验室的主管或是质控人员，对众多能力验证计划的报名、参试及结果分析，是否能够慧眼识珠，将证书及报告物尽其用，这不仅要看参试实验室的技术水平，更要看能力验证提供者的组织水平。本文将从微生物能力验证组织与报名及结果分析角度，为大家提供一点参考意见。本文仅代表个人观点，请根据自身情况采纳。
一、背景及现状
国内微生物能力验证首次出现在《GB 4789-84》颁布后，87年6月卫生部食品卫生监督所进行全国省市区及卫生防疫站微生物检验技术的质量控制。这是微生物能力验证的雏形。随着时代发展，现在不仅有国内机构（例如：中检院、检科院、各地海关（原CIQ）、第三方机构、菌株保藏中心等等）还有众多的国际机构（例如：FAPAS、LGC、RAEMA等等）组织微生物领域的能力验证。从检测指标的覆盖和组织频次几乎可以满足大部分实验室的质控计划。
二、组织流程
根据新的CNAS 17403的要求，凡是CNAS认可的能力验证提供者都应参考或遵循以下流程进行能力验证活动：
立项→发布计划→报名→制样→均匀性检验→稳定性检验→样品发放→稳定性检验→结果回收→结果统计/评价→结果发送→发布报告书
（1）立项
能力验证提供者每年年底或年初会向相关机构申报能力验证活动项目计划。计划内容包括：项目名称，组织形式，项目专家，样品基质，均稳检方法，统计方法，计划时间，相关费用等关键因素，经审批通过后可向社会发布征集报名。
（2）发布计划
计划发布的载体一般为，本机构网站、相关论坛、业内微信群组、往年参试实验室邮箱。通常使用电子邮件、PDF文档、快递邮件等形式。总之在实验室制定新一年的质控计划前，会有大批能力验证计划发布出来。往年3月左右还会有CNCA-A类等强制参加的能力验证计划。当然食药系统的承接机构每年还会接收到大量市级、局本级的能力验证样品。
（3）报名
一般国内微生物能力验证计划的报名费用在600-1000元左右；认监委A类免费。专业型机构每年会有多轮次的相同计划，但实验室主管人员要根据自身情况制定报名计划，以免错过报名或不能及时收到证书而失去参加能力验证的目的。
（4）样品制备
针对微生物PTP的样品一般有如下几种形式：市售食品（早期）；半固体菌株；冻干粉（常见）；冻干球；模拟样品等
1、市售食品（早期）：这种类型的样品因其均匀度较差，稳定性无法保证，现在已经没有任何机构使用该形式制备能力验证样品；
2、半固体菌株：与以上情况相类似，并且有破损后遗撒等风险，也被放弃使用；
3、冻干粉：随着冷冻干燥技术的发展，现在95%的微生物能力验证均使用该方法进行样品制备，冷冻干燥制备的样品不仅其稳定性能够得到保障，同时还方便快递、转运，不受路途遥远等限制；
4、冻干球：该方式来源于梅里埃的BIO-BALL，是对冷冻干燥的技术进行优化，将冻干粉制成5mm以内的小球，这种形式可节省制样单位的成本，并且可与任意样品进行混合，可谓是无基质样本；
5、模拟样品：这种样品一般分为湿样本和干样本。湿样本就是无需经过样品前处理，开样后可直接进行检测；而干样品一般都需要经过水话等处理方式才可进行检测，提供者一般可在这个步骤进行设计，例如：样品内加入抗生素；样品内污染杂菌等，给不按标准操作的参试者埋下陷阱；
样品制备过程中还有以下因素的考量：针对定量检测项目，提供者一般根据参试家数设计数量级分组，参试家数较多就会分为2-3组，家数较少就为1-2组，这种设计主要是为了防止各实验室之间数据的串通。针对定性检测项目，提供者一般会设计背景菌的添加种类和数量，来确定本轮能力验证的难度。
总结起来，现阶段的微生物能力验证样品制备几乎逃不出冷冻干燥的模式，冷冻干燥最重要的就是冻干保护剂，保护剂的质量关系到样品的均匀性、稳定性、运输稳定性最终直接影响检测结果的准确性。
（5）均匀性与稳定性检测
1、均匀性：能力验证样品制成之后，首先要进行均匀性检测，定量检测一般使用F检验和T检验的方式，并且在能力验证结果返回后计算出能力验证表差（σ），使用ss＜0.3σ准则在计算一次均匀性，来保证本轮能力验证计划中的样品均匀性满足标准要求。定性检测一般抽取20瓶左右的样品与指定值进行比较，检测结果与指定值均一致时即认为样品是均匀的。这些内容都会公布在最终结果报告书内，参试者应在收到结果后，仔细查阅结果报告书中的信息，一方面是分析自己通过/未通过的原因，自己在本轮能力验证计划中处于偏高、偏低还是中等的位置，同时还可以评价该组织机构的制样、数据统计、样品质量等水平。
2、稳定性：能力验证样品在发送前应进行稳定性检测，目的是为了证明在运输过程中样品可经受高温、低温、暴力运输等影响。同时还会计算稳定性测试中样品的测试结果的对数值与均匀性测试中的总平均值的绝对差值与能力评价标准差σ相比较，采用
准则，若
成立，则认为样品是稳定的。稳定性试验一般为高温模拟保存和样品模拟运输。稳定性试验应持续至能力验证计划最后一家参试实验室结果返回后。
（6）样品发放
提供者根据最初的立项设计发放相对应的样品数量至参试实验室，一般定量项目为1-2份，定性项目1-5份不等，甚至还有10分以上的，这就需要先期报名时与提供者机构进行沟通，以免造成不必要麻烦。样品多采用快递的形式，参试者应及时跟踪快递情况，毕竟在运输过程中会发生什么谁也不知道。
（7）结果回收
参试者应按照提供者的要求提交结果，一般为纸质版提交，专业型机构会通过网上提交的形式收集结果，总之参试者应仔细阅读作业指导书要求，按要求及时间要求提交结果。例：本人曾参加过一个能力验证，最终结果的提交要求，参试实验室根据自身认证情况出具检测报告，大部分实验室认为填写好结果报告单附好原始记录即可，凡是没有出具报告的均给了不满意结果。能力验证不仅是对你的检测能力的评价，也可能会评价到你的检测流程。
（8）结果统计/评价
针对定量项目：组织者会使用不同的统计学方法对收集回来的结果进行统计。还会根据同一项目，参试者使用的不同检测方法制定评价方式（例：CFU/mL和MPN/mL的差别。在CNAS-CL03-A001:2018中有详细说明）。经过统计分析后确定指定值（X），及能力验证标准差（σ）；评价方式现在流行使用的Z值比分数，若为测量审核可能出现En值等方式。确定指定值（X），及能力验证标准差（σ）的统计方法较多：
1、指定值（X）：可使用中位值，标准物质指定值，专家实验室公议值，参试实验室公议值等等；
2、能力验证标准差（σ）：可通过IQR四分位算法，ISO13528算法A（总参估计法），迭代法，以往经验值等等，标准差数值越大满意区间越大。本人曾经参加某国际组织的定量检测项目的能力验证其标准差竟然高达0.35（如下图：SDPA）。国内的定量检测项目标准差一般在0.05-0.15之间。
针对定性项目：组织者会根据预期设计的评价方式对结果进行比较后评价。简单说就是实验室检测值与指定值进行比较。如果组织者想提高参试难度，还可以让参试者对干扰菌进行鉴定，对目标菌进行血清学分型等方式。
（9）结果发送
经过统计和计算后，组织者会向参试者发送中期结果报告/结果通知单，实验室就知道了自己是否通过本次能力验证。对于未能通过的实验室，按照CNAS要求不得进行补测，但组织者一般会提供剩余样品进行测量审核，让实验室获得补测的机会。当然实验室也可将证书封存，不利用本次能力验证计划的结果进行质量控制。
（10）发布报告书
实验室收到证书后，在1-2月后组织者会发布最终结果报告书，实验室质量负责人应仔细阅读报告书，其中评价方式，本实验在本轮能力验证计划中所处的位置等信息，一目了然。可根据这些内容对本实验室的检测能力和技术水平进行评价，并作出相应的整改和修正。
三、小结
总结起来，实验室参加能力验证有如下目的：1、为了评价实验室检测能力；2、评价试验人员技术水平；3、为了扩项；4、为了满足检测频次要求；5、为了参加而参加。无论出于什么目的参加能力验证，参试者应明确自己参加能力验证的期望和目的，同时还应对提供者的技术水平进行评价。参加完能力验证拿到满意的证书还要结合最终结果报告书对本次通过进行总结和分析，不仅能够提高自身的检测能力，还可以看出提供者的技术水平，为今后报名提供参考。
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