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液相色谱应用若干问题

  • huangwenwei
    2019/11/28
  • 私聊

测试版面

  • 本人今年刚研一,老板让自己开始新的课题。要用液相色谱,有几个问题不太明白:我看文献中用得色谱柱是Luna C18柱150*4.6mm,我看了一下我们实验室的色谱柱为BDS HYPERSI C18 250*4.6mm我想问问用这柱子代替文献上的结果会差很多吗?因为我觉得就是柱子长了,可能时间久点而已。还有如果柱子的规格一样品牌不一样应该影响不大吧?还有就是文献中用的是双流动相洗脱含0.15%(v/v)乙酸的色谱级纯净水(溶剂A)和乙腈(溶剂B),洗脱方式是“最初为8%溶剂B,10min内梯度上升至40%,然后2min后梯度升为48%,最后1min上升到60%,并继续维持5min至基线平衡。”我想问问的是如果用的是双流动相洗脱那洗脱是溶液A是怎么变化的呢?因为本人是新人之前没用过液相,所以拜托各位了。
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  • junxi2008

    第1楼2019/11/28

    柱子长了,保留时间也会相对延长。
    流动相A为含0.15%乙酸的水,B为纯色谱级乙腈,洗脱方式是梯度洗脱,即刚开始0min是92%A+8%B,10min内升至为60%A+40%B,12min升至52%A+48%B,13min时为40%A+60%B,之后维持5min,梯度如下:
    时间(min) A(%) B(%)
    0 92 8
    10 60 40
    10~12 52 48
    12~13 40 60
    13~18 40 60

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