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荧光做药物与牛血清蛋白中的一些问题

xiang132

2020/01/09

在用布洛芬和华法令作为探针药物，用荧光光谱确定实验药物在BSA上面的结合位置的时候，需要计算加入布洛芬以及华法令之后的药物与BSA的结合常数，然后以此判断是在什么位点上的结合。
那么我想问下：1.用于计算结合常数的F0是纯BSA的荧光值，还是已经1:1加入标记的探针药物即布洛芬或者华法令的时候（还未加实验的药物）的荧光值呢？我的考虑是后者，这样子就把被标记药物猝灭的那部分BSA给扣除了，不算在被实验药物猝灭的行列中，从而来计算实验药物与BSA的结合常数。这样考虑对不对？
2.在这部分实验中，能不能用Ksv也就是猝灭常数作为一个标准来判断是哪个位点的结合，而不是结合常数。（在实际操作中，我做出来，结合常数和猝灭常数体现的规律是不一样的，自己也百思不得其解，希望大虾们能给我解惑！）

xiang132

第1楼2020/01/09

好像用荧光探针法不能确定探针结合那个位点
何况，BSA究竟有多少个结合位点也不一定（因探针不同而不同），具体那个位点在蛋白质的那个部位也难以确定!
还有不少的非特异性结合位点！
或许你做蛋白质荧光寿命能够给出探针与某个色氨酸的远近
这个不像金属蛋白质的金属结合位点那么确定！

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