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寡糖链样品 HPLC 荧光检测，信号衰减原因

chunmeimei

2020/02/12

大家好！请教大家一个问题：制备好的寡糖链样品溶液，放置在进样小瓶中；同一个样品瓶内的样品连续进样，为什么第二针的信号强度仅为第一针的十分之一。而如果将制备好的样品分装至两个样品瓶内，依次对两个样品瓶各进样一次，那么两次的信号强度就差不多，也就分开装样后，第二针的信号就不会衰减。这个现象在不同的检测人员身上都发生过不止一次。希望得到大家的解答。谢谢！
下面是一些实验方法，供大家帮助判断：
样品处理：将寡糖链与2-氨基苯甲酰胺（2-AB）进行衍生，然后在去除多余的2-AB,样品冻干后，最后用70%乙腈溶解上机分析
色谱柱：正相色谱柱
检测器：荧光检测器
流动相为：A(一定浓度的甲酸铵水溶液), B(乙腈)，梯度洗脱。

chunmeimei

第1楼2020/02/12

1.这是第一次看到这样的问题；请问你的正相色谱柱是硅胶柱还是氨基柱还是氰基柱啊？
2.衍生法，我认为主属性不高。可以这样试试，荧光检测器与蒸发光检测器串联应用一下，他们的检测原理不同，看看是不是变化一致，如重复性是一致的，那就说明，样品的制备方法有问题，以上操作首先保障机器没有问题，比如定量环，计量泵，检测器能力等。

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