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求助一个体内药物分析的提取方法

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  • 最近建立一个测定人血浆中药物(A)及其中间代谢物(C)的HPLC方法,做了一批加料样本,前处理之后,发现两者的回收率超低,几乎没有出峰。高氯酸沉淀蛋白之后,用液-液萃取,试过好几种提取液都不见得回收率增加,后发现买的标准品是A药物的盐酸盐(A.Hcl),我想是不是该药成盐之后,涡旋震荡离心之后留在了水层,不在上层有机相?(后来尝试沉淀蛋白之后,取上清液加入硫酸铵,试图将其中的Hcl剥离,使A药物游离而萃取出来,结果回收率确有增加,但还是不高,要不要试试加入氨水啊?或者有其他更好的处理),坑爹的试剂公司,我要的是A药,你给我送来个A的盐酸盐。C药的溶解性也不好(微溶于甲醇 、乙醇 、 氯仿,不溶于水),用高氯酸沉淀,貌似C药的损失也大,该怎么做前处理啊?看到文献中大多是用高氯酸直接沉底蛋白之后就直接进样分析,但这样对仪器和色谱柱不好,老外怎么就可以这样做。
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  • cfgong

    第1楼2020/02/17

    其实盐酸盐的价格会比碱基便宜很多的,而且碱基一般都是进口的,很昂贵。
    盐酸盐提取不好,可以加1N的NaOH适量简碱化在提取会好些,如果你用的是液液萃取,那我建议你不要沉淀蛋白,这是两种不同的提取方法,最好不要掺着用,原因蛋白沉淀后会将药物包裹进去,所以液液萃取时提不出来。你的C药有很好的脂溶性,A药经碱化后也是脂溶的,这样再液液萃取就可以了。

    具体步骤:空白血浆 100VL
    1N的NaOH 100VlL
    A
    C
    甲醇或者氯仿 500 VlL
    涡旋后离心,取上清液或者下清液,氯仿需氮气吹干后复溶进样。
    先试一试吧,希望有帮助吧!

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