液相色谱柱天理性质对分离的影响，蛋白质分析。

你说的300埃是硅胶颗粒的表面孔径，而不是粒径，做蛋白质是应该用大孔径的填料，但可以用小粒径的填料，不要用50-100埃表面孔径的柱子。
请查一下你用的柱子粒径是多少，一般C-18柱的粒径是5μ，可以换3μ的试试，但压力可能会比较高。
你说梯度已经很缓了，但还是建议在目标峰附近的梯度变化可以更缓，甚至用区段的等度，远离目标峰的流动相比例段可以变快一些。
另外有点奇怪，流动相B中TFA的浓度一般与流动相A是一致的，都是1%，不明白用0.08%的有什么优点。
你说的平头峰是不是超出响应范围的那种，如果是，那就是超载了，除非你用不是280nm而是205、210等末端吸收波长。
双头峰应该就是两个峰。
再有，如果降低进样量，分离度也会有改善。
以上供参考。