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新手请教:请问如何进行HPLC的柱子维护?

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  • 新手请教:请问如何进行HPLC的柱子维护?
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  • huangwenwei

    第1楼2020/04/25

    这个问题百度下,有很多答案的。
    色谱柱一般还是比较娇气的,注意的东西蛮多,我也接触不久,可以初略的谈谈。
    一,注意柱子的安装。对柱子应该要温柔,不要太粗鲁,如果柱子遇到较大的机械力,会使里面的填料塌陷。在安装中,应把接头扭紧不漏液,但却不能太紧,这个只有自己把握。
    二,流动相的选择和使用。一般柱子的pH要求在2——8左右吧(忘了具体了),所以流动相的pH最好应该注意点,实验前可以用pH计测定下,有必要时调整。流动相所选用试剂最好是色谱级的,这样减少对色谱柱的污染,对谱线的稳定也重要;如果是离子对缓冲液的话,最好在配制后,用滤膜过滤。
    三,样品的处理。一般样品都含有很多的杂志,所以常常需要过滤、离心、过滤膜等。
    四,流动相流速和温度不能急剧变化。流速和流动相不同配比应该缓慢改变,这样对柱子的冲击会小一点。
    五,柱子的平衡时间。一般在测试之前,都会对色谱柱进行平衡。如果是常规的流动相(甲醇水啊,乙腈水啊之类的),平衡时间会少点,而如果是离子对缓冲液,那至少需用600umol才能覆盖色谱柱,即需要用1ml/min平衡1小时以上。
    六,色谱柱在实验完后,需要冲洗。离子对缓冲液流动相的话,最好是把离子对缓冲液变成水的比例,加上有机溶液来冲(必须加有机液)
    如果柱子保存时间不长,可以用50%的乙腈水溶液,如果时间稍长,就最好用纯有机液保存,反相色谱柱推荐用乙腈。
    七,色谱柱不能放置过长时间,还是需要定期进行平衡的。
    我还是菜鸟,暂时想到这么多,希望对楼主有用。

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