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HPLC反相色谱法流动相常用的乙腈和甲醇比较

JOE HUI

2021/08/21

液质联用（LCMS）

HPLC反相色谱法流动相常用的乙腈和甲醇比较

1首先 乙腈价格高乙腈特别是HPLC级的价格很高但是文献或LC厂家所示的条件多用乙腈这是为什么呢现就此谈谈。

2吸光度 乙腈HPLC级的小。乙腈和甲醇的市销HPLC级和优级的吸收光谱中 乙腈HPLC吸收最小特别是在短波长上小 。所谓HPLC级是除去具有吸收UV的杂质在规定的波长上吸光度限制在规格值以内。在UV检测时产生的噪声小因此在进行UV短波长上的高灵敏度分析时乙腈HPLC级最适宜。另外在UV检测中的梯度基线上也是乙腈HPLC级产生鬼峰少虽然其他与水相溶性高的有机溶剂有各种各样但很难能找到比乙腈HPLC级吸收更小的。另外 甲醇的HPLC级和优级虽然所得的光谱相差不大但是优级不能保证吸光度有可能产生偏差价格也相差不大所以尽量使用HPLC级。

3压力,乙腈低.柱内承受的压力,根据有机溶剂的种类或混合比率的不同而异,水/乙腈,水/甲醇混合液的比率与输液压力的关系中,甲醇与水混合,压力增高,而乙腈同样与水混合且并不如此.所以,乙腈一方,在同样的流速下不在柱内加上多余的压力.从上述两项,可以确认使用乙腈的意义,那么,甲醇除了价格以外,还有没有其化优点呢?

4,洗脱能力,一般而言,乙腈较强.乙腈和甲醇分别用同样的比率与水混合时,一般情况下,乙腈的洗脱能力强.特别是混合比率低时,从咖啡因和苯酚的洗脱来看,获得同样的保留时间,乙腈的比率,只需甲醇的比率的一半以下即可.另一方面,有机溶剂100%或与此极接近时,从胡萝卜素和胆甾醇来看,常常都是甲醇的洗脱能力强.混合比在50比1等较为特殊时,调制的误差大,影响保留时间,或平衡化的时间长,乙腈遇到这种情况时,用甲醇的10比1混合代替乙腈,这样操作方便些.溶剂受温度影响时,不采用容器定量,而采用重量的方法(考虑比重) ,可使混合比的误差减小.

5,分离(洗脱)的选择性.两者的差异,乙腈和甲醇在分离的选择性上不同.由于有机溶剂分子的化学性质(甲醇和乙醇是质子性,乙腈和四氢呋喃是非质子性)不同所致.因此,在用乙腈类不能获得分离的选择性,就试用甲醇类看看.

6,峰形,用时出现差异.像水杨酸化合物(在邻位上具有羧基或甲氧基的苯酚化合物)等,用乙腈类时拖尾大,用甲醇类可抑制.可是,一般情况下,聚合物类反相柱,与硅胶柱相比,更具有峰形宽的倾向,特别是用聚苯乙烯分析柱芳香族化合物等时常见.这在流动相是甲醇时非常显著,而用乙腈时不明显.为此,用聚合物类反相用柱时建议采用后者(乙腈类) ,这是因为乙腈使凝胶膨润.

7,流动相的脱气,乙腈类要注意.混合溶剂的置制,不说在LC装置内,只谈预先在流动相瓶内进行时, (等浓度系统) .甲醇与水混合时发热,多余的溶解空气较易变为脱出气泡(脱气容易) .而乙腈由于吸热冷却,随着慢慢回到室温,产生气泡,所以要考虑脱气(加温搅拌,过滤膜,He脱气等) .

8,结论

以上反相色谱法流动相常用的乙腈和甲醇进行了比较.粗略地讲是,使用乙腈HPLC级最好,在选择性,峰形差时试用甲醇HPLC,但根据各种不用性质设计分析条件也是必要的.选择流动相是我们要考虑的因素:1能够适当的溶解样品,并且与非样品不发生反应2与其他使用的流动相能混合3粘度低,不为柱子增添其他负担4用UV检测器时,样品的检测波长里没有UV吸收5用RI检测器时样品的曲折率与流动相的曲折率差别明显6沸点与分析温度之间要有一定差距,避免产生气泡7不容易引燃,爆炸8对人体无害9廉价

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