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液相色谱空白出峰

  • Ins_e34a7519
    2022/03/04
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 我的流动相是0.1%甲酸水(A),100%甲醇(B)
    洗脱梯度是0-5min 5-40%B,5-10min 40-86%B,10-18min 86-90%B,18-25min 90-92%B
    色谱柱是反相色谱柱C18,4.6×100mm,3.5μm
    纯甲醇作为空白样
    甲醇用的是Merck的,过了0.22μm的膜
    3.4min出现的峰响应值特别高,请问各位大神,这个峰是与什么有关?会和我的洗脱梯度有关吗?我的洗脱梯度设置的时候最后没有回到最初的比例,会不会对柱子有损坏?
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  • 歌名

    第1楼2022/03/04

    应助达人

    1.流动相比例问题---------楼主的初始比例应该是甲酸水95%---甲醇5%,最后是甲酸水8%------甲醇92%,最后的比例最好是回到初始比例哈,不然下一针跟上一针会系统不稳没很难比对。
    2.3.4min大概率是溶剂峰,不用担心,对于LC来说5min前的都可看作是没什么保留时间的溶剂峰,入伏哦是目标物在5min前出来的要想办法演出目标物的保留时间。
    3.方法-------------------LC方法甲醇初始比例太低,在10min内升到了86%,增加了81%,抬升太快,导致这段时间的基线很难看,建议楼主再调整方法,在不影响分析的情况下可以增加初始甲醇的比例

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  • dadgoh

    第2楼2022/03/04

    应助达人

    最后梯度应慢慢回到初始比例一段时间,待基线平直后再进样。另外,溶样最好使用初始比例流动相。以减少进样峰。

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  • Ins_e34a7519

    第3楼2022/03/04

    我最开始用的洗脱梯度是0-10min 92-86%B,10-22min 86-80%B,22-35min 80-50%B,35-45min 50-20%B,45-50min 20-92%B
    这个洗脱梯度洗出来我的样品峰全部都挤在前9min,所以我就把起始有机相浓度降低了很多

    歌名(Ins_eedcdc41) 发表:1.流动相比例问题---------楼主的初始比例应该是甲酸水95%---甲醇5%,最后是甲酸水8%------甲醇92%,最后的比例最好是回到初始比例哈,不然下一针跟上一针会系统不稳没很难比对。2.3.4min大概率是溶剂峰,不用担心,对于LC来说5min前的都可看作是没什么保留时间的溶剂峰,入伏哦是目标物在5min前出来的要想办法演出目标物的保留时间。3.方法-------------------LC方法甲醇初始比例太低,在10min内升到了86%,增加了81%,抬升太快,导致这段时间的基线很难看,建议楼主再调整方法,在不影响分析的情况下可以增加初始甲醇的比例

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  • Ins_e34a7519

    第4楼2022/03/04

    溶样使用初始流动相比例是什么意思啊
    我样品溶剂是100%甲醇,初始流动相比例也应该是100%甲醇吗?

    dadgoh(dadgoh) 发表:最后梯度应慢慢回到初始比例一段时间,待基线平直后再进样。另外,溶样最好使用初始比例流动相。以减少进样峰。

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  • Ins_e34a7519

    第5楼2022/03/04

    这是我的样品图,峰面积占比最高的是溶剂峰,其它峰都很低,这是不是说明我的样品里没什么东西啊,还是说提取出了东西,但含量很低

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  • Insp_2be455b9

    第6楼2022/03/04

    进来看看学习

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  • 检测老菜鸟

    第8楼2022/03/04

    应助达人

    初始有机相比例再降低点。最后的浓度最好和初始浓度对应。
    前面那个不像是溶剂峰啊,走空白也出吗?

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  • Ins_e34a7519

    第9楼2022/03/04

    对,走空白出的

    检测老菜鸟(v3295053) 发表:初始有机相比例再降低点。最后的浓度最好和初始浓度对应。前面那个不像是溶剂峰啊,走空白也出吗?

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  • 安平

    第10楼2022/03/04

    应助达人

    空白梯度出现鬼峰 ,一般是流动相污染所致。

    建议考察流动相质量,检查流动相流经的滤头,管路,等部件是否污染。


    可以考虑使用鬼峰捕集柱

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