分离纯化案例-千金藤素的提取和纯化

千金藤素的提取和纯化

摘要：本研究从中药山乌龟中提取得到含千金藤素的提取液；该提取液用键合硅胶层析柱进行纯化，得到含量大于99%的千金藤素，该方法简单、环保、经济且具备工业放大可行性。

*：2022年5月10日，中国科学家发现的新冠治疗新药获得国家发明专利授权。专利说明书显示，10μM（微摩尔/升）的千金藤素抑制冠状病毒复制的倍数为15393倍。美国学者之后也在《科学》发表论文证实，千金藤素的数据在其研究的26种药物中数据亮眼，而且优于已经获批上市的瑞德西韦和帕罗韦德。

实验部分

1. 样品提取：取中药材山乌龟片，用研钵捣碎至粉末，称取5g于具塞锥形瓶中，加入200ml甲醇，超声提取20min，静置冷却。

2. 色谱分析：将提取液用甲醇稀释2倍后，过0.45um膜，进液质联用仪进行色谱分析，色谱条件如下：

色谱柱：Bioseps AQ C18, 2.1*100mm, 3um, 100?;

流动相：甲醇：0.1%TEA=80:20(V/V)

检测波长：282nm

流速：0.3ml/min；

柱温：35℃

进样量：1ul

质谱电压：3000V, 扫描范围150~1500m/z, Pos-TIC模式

提取液检测液质检测图：

3. 层析纯化：将提取液过0.45μm的膜，进制备液相色谱进行纯化。制备色谱工艺参数如下：

层析填料：Bioseps-Flash C18, 20-45μm，100?；

填装规格：20×250mm；

进样体积：10ml (折合样品500mg)

洗脱液：甲醇：水=85:15（V/V）

洗脱流速：18mL/min;

收集方式：紫外检测282nm, 35-39.5min;

4. 后处理：馏分35℃下减压旋蒸除去甲醇，冷冻干燥，得白色固体,称重为1.23mg.

5. 纯化检测，经LCMS检测，样品纯度为97.2%, 检测LCMS图如下：

小结：

1. 由纯品质量折算山乌龟中千金藤素的含量约为0.246%；

2. 该工艺使用的层析填料为大粒径键合硅胶，有利于放大至规模化生产，建议的生产设备配置如下：

DAC 800, 系统耐压2MPa，配置集成化层析控制柜，符合GMP生产要求，产能估算，每日分离提取液160L，折合中药样品8kg，可得千金藤素纯品20g.