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【实战宝典】影响反胶团萃取效率的主要因素有哪些?
小官人-闭关修炼中
2022/07/08
私聊
前处理综合讨论
链接:
https://bbs.instrument.com.cn/topic/7893788
问题描述:反胶团萃取中,都有哪些因素可以影响萃取效率?
解答:
影响反胶团萃取效率的主要因素有表面活性剂、溶液离子强度、溶液
pH
、萃取温度等,下面依次对其进行简单介绍:
a
表面活性剂。表面活性剂是影响反胶团萃取效率的一个重要因素:不同的表面活性剂,形成反胶团的含水率不同,胶团含水率越高,反胶团粒径越大,对蛋白质的溶解度越高。然而,当反胶团含水率过高时,形成的反胶团过大,不稳定,使得萃取效率降低;不同的表面活性剂,形成反胶团的带电情况也不同,为避免在过酸或过碱条件下萃取,表面活性剂的选择还需参考目标蛋白质的等电点,对于等电点较低、分子量较大的蛋白质,适合选用阳离子型表面活性剂,而对于等电点较高、分子量较小的蛋白质,则适合选用阴离子型表面活性剂;表面活性剂的浓度也会影响萃取效率,一定浓度范围内,随着表面活性剂浓度的增加,萃取效率不断提高,然而,当表面活性剂浓度超出该浓度范围时,有机相黏度的增大程度会对两相的分层速度造成影响,因此,在实际工作中需选择合适的表面活性剂浓度;部分体系中还需加入助表面活性剂,以提高目标组分的选择性与萃取效率。
b
溶液离子强度。溶液离子强度一定程度上会对蛋白质表面电荷与反胶团内部电荷起到屏蔽作用。随着溶液离子强度的增加,蛋白质分子与反胶团内表面之间的静电吸引力减弱,使得蛋白质很难进入反胶团内部。与此同时,溶液离子强度的增加还会减弱表面活性剂极性头之间的排斥力,使得反胶团变小,降低反胶团对蛋白质的溶解度。因此,在实际工作中,我们可通过调节溶液离子强度来实现蛋白质的萃取与反萃取。此外,不同蛋白质达到反胶团内溶解度最小时的溶液离子强度不尽相同,基于此,我们可通过调节溶液离子强度将不同蛋白质分离。
c
溶液
pH
。反胶团萃取中,溶液
pH
一般会影响蛋白质与反胶团间的静电作用。蛋白质作为双性物质,有各自确定的等电点(
pI
),当溶液
pH>pI
时,蛋白质表面带负电,当溶液
pH
时,蛋白质表面带正电。对于反胶团,表面活性剂的极性端在胶团内部,使得胶团内表面带一定电荷,如阳离子型反胶团内表面带正电,阴离子型反胶团内表面带负电。当蛋白质分子与反胶团内表面所带电荷不同时,由于两者间的静电吸引力,蛋白质进入反胶团内部,完成萃取。相反,当蛋白质分子与反胶团内表面所带电荷相同时,由于两者间的静电排斥力,蛋白质无法萃取到反胶团中。由此可见,确定溶液
pH
时应综合考虑反胶团、蛋白质两者的性质,以获得满意的萃取效率。此外,溶液
pH
不能使蛋白质变性失活。
d
萃取温度。通常情况下,萃取温度的升高有助于反胶团的稳定存在,可促进生物分子进入反胶团内,提高萃取效率。不过,萃取温度过高反而会降低萃取效率,一方面温度过高会使部分蛋白质变性失活,另一方面温度过高会使体系内分子运动加快,反胶团变小,对蛋白质的溶解度减小。
以上内容来自仪器信息网《样品前处理实战宝典》
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