请问在线SPE-UPLC-MS/MS单组分方法学开发时条件优化的先后顺序是什么呢

应助达人

未知组分首先要优化好质谱条件，液质流动相可选择有限，一般正离子模式首先考虑0.1%甲酸和乙腈，负离子模式水和乙腈，液相梯度程序一般一个有机相比例低到高的大梯度就可以。SPE的选择可以先查阅一些文献，根据组分性质如酸性可选择阴离子交换柱，碱性可选择阳离子交换柱，还有通用型如HLB C18等，选好spe小柱后可以先用待测组分标样测一下柱效，优化好淋洗 洗脱等程序

应助达人

方法开发一般遵循一个原则，找得到，分得开，跑得快。因此，首先得接二通做质谱条件，而后找个常规c18柱，以常规流动相如甲醇水或乙腈水跑跑试试能不能找到峰，不管加氢还是减氢常规流动相应该都能做出来，只不过灵敏度和峰型等有差异而已。找到峰后，固定流动相条件，可以筛一下不同柱子。柱子确定后再试试不同流动相的表现，包括酸碱性变化，梯度变化等，确定流动相条件。以上是常规参数的方法，有些目标物特殊，做好质谱条件后接柱子找不到峰，这样的得找找相关文献是不是用到特殊的柱子或使用非常规流动相等。

感谢解答！还想请问一下的是，SPE柱和分析柱的流动相条件一般怎么考虑呢？先摸SPE柱的条件，再摸分析柱的条件吗？是不是最好用相同的流动相以减少溶剂效应比较好？分析柱用UPLC的条件该从哪些方面限制对SPE柱可能的损害呢？