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HPLC-MS/MS法同时测定人血浆中伊布替尼、泽布替尼和奥布替尼的含量

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2023/02/08

私聊

液质联用（LCMS）

HPLC-MS/MS法同时测定人血浆中伊布替尼、泽布替尼和奥布替尼的含量

背景

淋巴瘤是起源于淋巴造血系统的恶性肿瘤，主要表现为无痛性淋巴结肿大、肝脾肿大等，且伴发热、盗汗、消瘦、瘙痒等全身症状，在中国的发病率大概是十万分之六左右，且有逐渐升高的趋势。因淋巴瘤具有高度异质性，该疾病的治疗较为棘手且不同病理类型和分期的淋巴瘤无论从治疗强度和预后上都存在很大差别。目前，临床上多采用与化疗与药物结合的治疗方式，如伊布替尼、泽布替尼和奥布替尼均为该疾病的靶向药物，具有相对较优的治疗效果，使得多种类型淋巴瘤的生存期都得到了很大提高。然而，相关研究均表明靶向药物疗效的个体差异比较大，部分患者的血药浓度在给药后并未达到理想值，导致药物治疗失败。

治疗药物监测（Therapeutic drug monitoring，TDM）是指在临床治疗过程中，通过采血测定药物的稳态谷浓度或峰浓度来了解患者体内的暴露量，并根据具体情况制定个性化的给药方案。高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）作为一种简单、快速且灵敏的监测手段，在测定药物浓度方面具有巨大优势。因此，本研究旨在通过HPLC-MS/MS法测定患者体内伊布替尼、泽布替尼和奥布替尼的血药浓度，对保证靶向药物的血药浓度处于有效浓度范围、实现药物治疗的效益最大化具有重要意义。

实验方法

1 试剂与材料

1.1 仪器

YS EXT 9900 MD 高效液相色谱串联质谱检测系统（山东英盛生物技术有限公司）、MIX-25P涡旋振荡仪（杭州米欧仪器有限公司）、TGL-16离心机（山东百欧医疗科技有限公司）、MS105DU电子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

1.2 试剂　

甲醇（色谱纯，ThermoFisher）、甲酸（质谱级，ThermoFisher）、乙酸铵（色谱纯、上海阿拉丁生化科技股份有限公司）、纯净水。

1.3 标准品

标准品	编号	标准品来源
伊布替尼	510187	中国食品药品检定研究院
泽布替尼	420076	中国食品药品检定研究院
奥布替尼	420101	中国食品药品检定研究院

2 仪器方法

2.1 色谱分析条件

时间（min）	流速（mL/min）	A%-2mM乙酸铵-0.1%甲酸水	B%-0.1%甲酸甲醇
0.00	0.4	90	10
0.30	0.4	90	10
1.20	0.4	15	85
2.20	0.4	15	85
2.30	0.4	90	10
3.00	0.4	90	10
洗针液	甲醇-水（1：1）
色谱柱	纳谱分析ChromCore 120 C18 3 μm, 2.1×30 mm
柱温	40 ℃
进样器温度	10 ℃
进样量	1 μL

2.2 质谱条件

离子源参数

Spray Voltage（V）	Shealth Gas（Arb）	Aux Gas（Arb）	Sweep Gas（Arb）	Ion Transfer Tube Temp（℃）	Vaporizer Temp（℃）
3000	50	20	5	350	450

离子对参数

化合物	加合方式	Q1	Q3	CE（V）	RF Lens（V）
伊布替尼	M+H	441.3	304.3*	45	115
伊布替尼	M+H	441.3	138.1	40	115
泽布替尼	M+H	472.3	290.3*	45	125
泽布替尼	M+H	472.3	278.3	36	125
奥布替尼	M+H	428.3	357.3*	45	105
奥布替尼	M+H	428.3	340.3	50	105

注：“*”表示为定量离子

3 血浆样品前处理

取标准曲线样本、质控样本和临床样本100 μL，加入300 μL含同位素内标甲醇溶液，涡旋混匀1 min，将样品置于4 ℃离心机中离心（14000 rpm，10 min），取40 μL上清液后加入160 μL流动相稀释后转移至进样瓶中，置于自动进样器中进行后续检测。

实验结果

1 实验谱图

如下图所示，血浆样本中伊布替尼、泽布替尼和奥布替尼保留时间分别为1.64、1.54和1.50 min。

2、线性范围

伊布替尼：y=0.01771x+0.005002，R²=0.9910；

泽布替尼：y=0.01203x+0.003356，R²=0.9916；

奥布替尼：y=0.005308x-0.01356，R²=0.9935。

实验结论

临床治疗药物监测过程中，选用纳谱分析ChromCore 120 C18（30×2.1 mm, 3.0 μm）色谱柱对三种淋巴瘤治疗靶向药进行分离和检测。实验结果显示，3种药物色谱峰型良好、保留时间合适、临床样本长时间分析稳定性好，满足临床样本检测对于时效性与稳定性的要求。

公司名称：北京高博医疗集团质谱研究院

色谱柱信息：纳谱分析ChromCore 120 C18 3μm, 2.1×30mm，序列号：11310-S01002

分
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