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质谱技术在临床感染诊断中的应用
检测人王大锤
2023/07/17
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气质联用(GCMS)
1. 临床常见细菌的鉴定:2009年Seng等用1660株细菌对MALDI-TOF MS常规鉴定细菌进行前瞻性研究,结果显示MALDI-TOF MS是一种经济、快速、准确的常规细菌鉴定方法,未来有可能取代传统的革兰染色和生化方法。此后,MALDI-TOF MS在临床应用迅速增加。在Medline数据库用“MALDI tof bacteria identification”作为MeSH检索词,从2009至2013年1月发表相关文章467篇,其中2011至2013年发表323篇。由此可见MALDI-TOF MS近几年在临床微生物检验中备受关注。
另外,MALDI-TOF MS对弯曲菌、螺杆菌、军团菌等苛氧菌、少见菌等的鉴定,解决了微生物实验室对这类病原菌的鉴定、临床对其感染的诊断和治疗、流行病学资料缺失等的瓶颈问题。
2. 样本直接检测:应用MALDI-TOF MS直接鉴定阳性血培养标本中的细菌和真菌可以极大地提高检测速度。大量的研究尝试用不同的方法来处理血标本,由于血培养基各异、数据库和分析软件等差异都对样本前处理的方法标准化造成了一定的困难。布鲁克公司研发了血培养标本的前处理试剂盒,用于阳性血培养标本直接质谱鉴定的前处理。研究显示革兰阴性菌的准确率优于革兰阳性菌,而对厌氧菌、α-溶血性链球菌和多个细菌混合样本的鉴定存在困难。新的富集技术的应用(比如附加特异性抗体亲和特定蛋白)以及相应分析软件的改进,将使MALDI-TOF MS直接用于血液病原菌的检验成为可能,即MALDI-TOF MS作为一种快速、使用简便,低成本消耗的检测技术,有望取代传统血培养检测技术,为血培养中病原菌的快速诊断提供有力支持。此外,临床的尿液和脑脊液标本也可以经一定处理后,用质谱技术进行蛋白谱的分析用于疾病的辅助诊断。
3. 真菌鉴定:有学者应用MALDI-TOF MS对327株菌(其中19株为酵母菌)在种的水平上鉴定正确率为61株为酵母菌)的鉴定正确率为92%。
4. 非结核分枝杆菌鉴定:国外学者对107株分枝杆菌临床分离株(包括结核分枝杆菌复合体),利用声波降解的热失活方法和利用玻璃珠进行细胞裂解的方法进行失活和提取,再利用MALDI-TOF MS方法进行鉴定,发现两种方法在种/属水平上成功鉴定率分别为82.2%和88.8%。周昭彦等采用MALDI-TOF MS对83株非结核分枝杆菌(临床分离非结核分枝杆菌15株和医院供水系统环境分离非结核分枝杆菌68株)进行快速鉴定方法及其可行性、准确性和重复性进行研究,并得出结论认为MALDI-TOF MS可快速准确地鉴定临床和环境分离的非结核分枝杆菌,在临床实验室常规鉴定方面有着较好的应用前景。
5. 质谱技术检测病原菌耐药性:除快速鉴定外,质谱技术也被尝试用于检测一些临床常见的耐药基因,例如耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌、万古霉素耐药的肠球菌等的识别,鲍曼不动杆菌相关的耐药机制与产生条件等,为控制耐药菌株播散流行及治疗提供新的策略。
质谱技术为临床微生物实验室提供了快速而准确鉴定细菌、分枝杆菌、真菌等的方法,其中临床标本的直接鉴定成为未来研究的方向。将MALDI-TOF MS与全自动药敏检测仪相连,整合到实验室自动化流水线后,可以提高检测速度,缩短患者住院时间,提高疗效,降低医院和患者的经济负担。另外MALDI-TOF MS与其他分子生物学检测技术联合,可以对临床产酶菌株的检测方法、基因分型及测序、蛋白质组学方面开展更加深入的研究。MALDI-TOF MS有望成为临床实验室微生物鉴定分型等领域发展的重要方向。
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