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如何使用酶联免疫分析仪检测生物实验

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2023/08/31

环境监测政策法规

　　酶联免疫分析(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA)是一种常用于检测生物分子(如蛋白质、抗体、激素等)在样本中的定量或定性测量的实验技术。以下是使用酶联免疫分析仪检测生物实验的一般步骤：

　　准备实验材料和试剂：

　　样本：可以是血清、尿液、细胞上清等。

　　标准品：已知浓度的目标分子，用于绘制标准曲线以计算未知样本中的浓度。

　　酶标抗体：用于与目标分子结合的抗体，被标记上酶以便后续检测。

　　捕获抗体：涂覆在微孔板上，用于捕获目标分子和酶标抗体复合物。

　　涂覆微孔板：

　　向微孔板中加入捕获抗体，使其在孔底吸附。

　　将孔板放置在冰箱或其他适当条件下孵育，让抗体吸附稳定。

　　加入样本和标准品：

　　加入待测样本和一系列已知浓度的标准品到不同的孔中。

　　标准品的浓度通常是一个浓度梯度，用于绘制标准曲线。

　　孵育和洗涤：

　　孵育样本和标准品，使目标分子与捕获抗体结合。

　　之后，使用洗涤缓冲液洗涤孔板，去除未结合的物质。

　　加入酶标抗体：

　　加入带有酶标记的抗体，它会与样本中的目标分子结合形成复合物。

　　孵育和洗涤：

　　孵育酶标抗体，使其与捕获的目标分子结合。

　　再次用洗涤缓冲液洗涤孔板，去除未结合的物质。

　　加入底物：

　　加入含有底物的溶液。底物被酶催化后会产生颜色或荧光，信号强度与目标分子的浓度成正比。

　　停止反应：

　　加入停止液终止底物的反应，防止颜色或荧光的继续产生。

　　测量信号：

　　使用酶联免疫分析仪读取每个孔的颜色或荧光信号强度。

　　将信号与标准曲线进行比较，计算样本中目标分子的浓度。

　　数据分析：

　　根据标准曲线和信号强度，计算样本中目标分子的浓度。

　　请注意，每个实验都需要根据具体的样本和目标分子进行优化和调整。操作过程中应严格遵循实验操作规程，以确保结果的准确性和可重复性。如果你是初次进行ELISA实验，建议在有经验的实验室或专业人士的指导下进行。

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