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什么是CAR-NK细胞疗法?CAR-NK细胞制备过程详解
Ins_bf0c01c3
2023/09/04
私聊
生命科学仪器综合讨论
什么是
CAR-NK
细胞疗法
?
自然杀伤(
NK
)细胞是具有高度细胞毒性的非特异性免疫效应细胞,具有消除肿瘤细胞和感染病毒细胞等异常细胞的能力。
CAR-NK
细胞疗法在血液瘤和实体瘤中发挥显著的效果,与
CAR-T
疗法相比,
CAR-NK
细胞疗法更安全,引起细胞因子释放综合征(
CRS
)和移植物抗宿主病(
GVHD
)的可能性更低,具有更强的抗肿瘤活性,是一个现货免疫细胞的理想选择。
CAR-NK
细胞的来源广泛,包括脐带血(
UCB
)、外周血(
PB
)、人诱导多能干细胞(
hiPSCs
)、人胚胎干细胞(
hESC
)、造血干细胞(
HSC
)和
NK
细胞系。
CAR-NK
细胞的制备过程:
? 对不同来源的
NK
细胞进行分离和制备时,可以用
CAR
表达载体(如慢病毒)进行修饰;
? 在特定的扩增培养基中扩增
NK
细胞;
? 建立的
CAR
‐
NK
细胞通常采用静脉注射,以选择性杀死肿瘤细胞。
CAR-NK
细胞疗法整体解决方案
义翘神州为制药公司提供综合性的
CAR-NK
细胞疗法开发解决方案,包括从
CAR
开发、
NK
细胞获取和表征、
NK
细胞活化和扩增、
NK
细胞纯化、
CAR-NK
细胞制备到
CAR-NK
细胞质量控制的每一阶段。
①
CAR
开发:
CAR
可特异性识别肿瘤细胞表面抗原并与其结合,因此获得高质量
CAR
是开发中的关键步骤。基于
15+
年的经验积累和技术沉淀,义翘神州建立了四大抗体开发平台(噬菌体抗体库、杂交瘤、流式单
B
细胞、
Beacon®B
细胞)满足
scFv
发现的需求。同时我们还提供用于
scFv
筛选和
CAR
亲和力检测的多种
CAR-NK
靶点蛋白和
SPR/BLI
亲和力检测服务,支持
CAR-NK
研究。
②
NK
细胞获取和表征:
NK
细胞源于脐带血(
UCB
)、外周血(
PB
)、人诱导多能干细胞(
hiPSCs
)、人胚胎干细胞(
hESC
)、造血干细胞(
HSC
)和
NK
细胞系。由于
NK
细胞来源广泛,需要对
NK
细胞进行分离,清除
T
细胞、
B
细胞或其他污染物。
NK
细胞被定义为
CD3-CD16+CD56+
的淋巴细胞。根据
NK
细胞表面标志物
CD16
和
CD56
的差异性表达,可将
NK
细胞划分为两个亚群
CD56brightCD16dim/
? 和
CD56dimCD16+
。根据这些不同的表面标志物,利用流式抗体进行检测从而区分
NK
细胞亚群。义翘神州已开发高质量的
CD3
、
CD16
、
CD25
、
CD56
和
KIR2DL1
流式抗体,可有效分离和表征
NK
细胞群或亚群。
③
NK
细胞活化和扩增:
在外周血白细胞中,只有约
5%-15%
为
NK
细胞,如何获得足够的
NK
细胞仍是患者采用免疫治疗的主要挑战。从
NK
细胞活化阶段进行高效的
NK
细胞转导,以诱导细胞增殖。目前
NK
细胞培养存在多种培养方式,应用最广泛的两种方法为饲养层细胞培养和细胞因子培养。
GMP
级细胞因子
相关法规明确规定,对于细胞治疗药物中原材料的选择,应尽量采用符合药典标准的原材料或批准上市的药品,优先级是:药品级>
GMP
级>
RUO
级。
GMP
级细胞因子对于
NK
细胞的发育和存活具有重要调节作用,如
IL-21
能诱导
NK
细胞的成熟,并增强其细胞毒性。
GMP
级细胞因子作为重要原料应用到
CAR-NK
药物开发过程中,可在体外扩增过程中高效激活
NK
细胞。义翘神州严格遵循
GMP
质量管理体系,成功开发出高质量、高活性的
GMP
级细胞因子:
IL-2
、
IL-7
、
IL-12
、
IL-15
、
IL-21
,助力
CAR-NK
细胞培养。
④
CAR-NK
细胞制备:
慢病毒包装是
CAR-NK
细胞制备的关键环节。影响慢病毒包装是否成功的因素包括载体系统、转染试剂和慢病毒滴度等。义翘神州提供高品质的无血清
HEK293
培养基、
Sinofection®
转染试剂和超级核酸酶,用于慢病毒载体的高效转染。同时我们还提供细胞库检测服务和核酸酶残留检测试剂盒,满足
CAR-NK
细胞制备需求。
⑤
CAR-NK
细胞质量控制:
为确保
CAR-NK
细胞治疗产品的安全性,需要进行严格的质量控制检测,包括活细胞比例检测、细胞群或亚群检测、
CAR
阳性率检测和杀伤效力评价等。义翘神州提供高质量的产品和服务,支持
CAR-NK
细胞质量控制检测。
更多详情可以参看:
https://cn.sinobiological.com/category/solutions/car-nk-therapy
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