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多克隆抗体的制备方法及流程:一种生物医学领域的实用指南
Ins_bf0c01c3
2023/11/08
私聊
生命科学仪器综合讨论
在生物医学领域,
多克隆抗体
是一种非常重要的工具。多克隆抗体是由免疫动物产生的一类具有识别多种抗原表位的抗体,具有广泛的应用价值。制备多克隆抗体的方法有多种,其中最常用的是免疫接种和杂交瘤技术。本文将介绍多克隆抗体的制备方法及流程。
多克隆抗体的制备方法
主要是通过动物免疫,刺激宿主产生大量抗体。通常选用兔子和山羊作为免疫动物,因为动物反应良好,能提供足够数量的血清。用于免疫的动物应适龄、健壮、无感染性疾病、最好为雄性,此外还要注意动物的饲养,以消除动物的个体差异以及在免疫过程中死亡的影响。一般采用皮下或背部多点皮内注射免疫原,多次免疫之后,激发动物机体免疫系统产生抗体,最后获取动物高免血清获得抗体;进一步通过纯化及验证后才可以使用。
利用兔子制备多克隆抗体涉及
4
个关键步骤,具体概述如下
:
步骤
1
:抗原制备
蛋白抗原或多肽抗原合成是多抗制备的第一步。目标抗原的纯度对于抗体来说很关键,直接影响最终多克隆抗体的质量。抗原中的杂质(<
1%
)也可能具有免疫原性(例如许多细菌抗原),可能导致抗体识别杂质,而不是目标抗原。
义翘神州拥有重组蛋白表达平台,在
CHO
、
HEK293
和大肠杆菌中有着丰富的重组蛋白表达经验,可提供专业高效的抗原制备服务。
步骤
2
:动物免疫
多克隆抗体制备时,如何选择动物取决于这
3
个方面:所需抗血清的数量、抗原物种与免疫动物之间的亲缘关系以及免疫原制备的经验。兔子通常是多抗制备的首选,体积大,每次可抽取多达
25mL
的血清,对兔子本身无显著的不良影响。
免疫佐剂是多抗制备时用于增强机体免疫应答的辅助物质。弗氏佐剂是一种最常用的免疫佐剂,分为完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂。在佐剂存在的情况下,将蛋白抗原通过肌肉注射、皮内注射或皮下注射的方式注入选定种类的动物体内。初次免疫的
4~8
周后,开始进行加强免疫,并每隔
2~3
周进行
1
次。初次免疫和每次加强免疫之后,都需要进行动物采血并测定抗体效价。当抗体效价达到预期水平时,即可放血制备抗血清。
步骤
3
:抗体纯化
对于多克隆抗体的制备,亲和纯化是一种高效的纯化方法。
蛋白
A/G
亲和纯化可从抗血清富集免疫球蛋白
G
(
IgG
),并且除去大量不需要的蛋白。但产品仍然有大量非特异性
IgG
的存在,可能导致在各种
ELISA
、免疫组织化学和蛋白质免疫印迹等免疫检测中背景偏高。
为了从抗血清中分离出特异性多克隆抗体,通常使用抗原特异性亲和纯化。抗原亲和纯化可除去大量非特异性
IgG
组分,并且富集与目标抗原发生特异性反应的免疫球蛋白组分。
步骤
4
:质量控制
纯化后,抗体需要经过一系列
QC
检测,以确保多克隆抗体的质量。抗体浓度测定是在
280nm
(
A280
)测定其
OD
值。使用
SDS-PAGE
电泳用于检测多抗的纯度。
ELISA
法可用于测定多克隆抗体的效价。根据下游检测需求,可对抗体进行标记,用于
IHC
、
WB
、
ELISA
等实验。
关于更多
多克隆抗体制备
详情可以关注:
https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/pab-production
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