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ELISA类型及其原理:常见问题解答
Ins_bf0c01c3
2023/12/08
私聊
生命科学仪器综合讨论
酶联免疫吸附测定(
ELISA
)又称酶免疫测定(
EIA
),是一种广泛应用于免疫学检测领域的生化技术。该技术的主要原理是利用抗体或抗原与酶的结合,将免疫反应转化为可定量测定的信号。在
ELISA
实验中,通常将含有未知量的抗原固定在固相载体上,如微孔板。然后,加入特异性抗体与抗原孵育,使抗体与抗原结合。最后,加入酶标记的二抗,与特异性抗体结合。通过酶促反应,将无色的底物转化为有色的产物,从而实现对抗原的检测。根据实验设计及目的不同,
ELISA
可分为间接
ELISA
、直接
ELISA
、夹心
ELISA
和竞争
ELISA
等不同类型。下面将分别介绍它们的原理及常见问题:
间接
ELISA
原理:
间接
ELISA
的原理是基于抗原和抗体的特异性结合。在间接
ELISA
中,首先将待测物质(通常为抗原)固定在固相载体(如微孔板)上,形成抗原固定化的固相。然后,加入一定浓度的非特异性抗体,使其与固相上的抗原结合。接下来,加入特异性抗体,它与非特异性抗体结合在一起,形成抗原
-
非特异性抗体
-
特异性抗体复合物。最后,通过酶标记的二抗或酶标记的蛋白
A/G
结合到特异性抗体上,通过酶促反应产生荧光、发光或颜色变化等信号,从而检测抗原的存在和浓度。
直接
ELISA
原理:
直接
ELISA
的原理是将酶标记的抗体或抗原直接与待测物结合,形成夹心复合物,然后加入底物检测酶的活性。
具体来说,直接
ELISA
方法是将酶标记的抗体或抗原直接固定在固相载体(如微孔板)上,然后加入待测样本,使其与固定化的抗体或抗原结合。随后加入底物,通过酶促反应产生荧光、发光或颜色变化等信号,从而检测待测物的存在和浓度。
直接
ELISA
方法的优点是操作简单,但灵敏度较低,适用于检测浓度较高的待测物。同时,该方法也受到固相载体、抗体或抗原的性质和质量的影响,因此需要选择合适的试剂和实验条件。
夹心
ELISA
原理:
夹心
ELISA
的原理是将特异性抗体包被于固相载体上,加入待测抗原,使其与固相上的抗体结合,形成固相抗原
-
抗体复合物。然后加入酶标记的二抗,使其与固相抗原
-
抗体复合物中的抗体特异性结合,形成固相抗原
-
抗体
-
酶标抗体复合物。最后加入底物显色,通过观察颜色变化和显色深浅,判断待测抗原的存在与否和浓度高低。
夹心
ELISA
方法的优点是灵敏度高、特异性好、操作简便、易于自动化等。由于使用了固相载体,可以将待测抗原和游离的未结合的抗原分离,从而提高了检测的准确性和可靠性。此外,夹心
ELISA
还可以用于检测小分子和大分子抗原,应用范围广泛。
竞争
ELISA
原理:
竞争
ELISA
的原理是利用酶标记技术,通过酶与酶底物反应的颜色变化来检测样品中特定物质的含量。竞争
ELISA
的基本步骤包括涂膜、孵育、洗涤、加底物和反应终止。在
ELISA
板的孔中涂覆含有特定抗原的抗体,使其与孔壁结合。然后,加入待测样品和酶标记抗体,使其与孔中的抗原结合。在孵育过程中,待测样品中的目标物质与酶标记抗体竞争与抗原结合,形成抗原
-
酶标记抗体
-
目标物质复合物。经过洗涤步骤,将不与抗原结合的物质洗去,以减少干扰。接下来,加入底物,酶与底物反应产生颜色变化。最后,通过加入反应终止剂停止酶反应,将颜色的强度与目标物质的含量相关联。
ELISA
常见问题解析:
ELISA
的优势是什么?
与其他免疫分析方法相比,
ELISA
有很多优点:
ELISA
检测更为准确,且具有高灵敏度和特异性;与其他用于体内检测物质的方法(如放射免疫测定,
RIA
)相比,具有更明显的优势。此外,
ELISA
还具有如无需放射性同位素(放射性物质)或昂贵的辐射计数器(辐射计数装置)等其他优势。
如何保存义翘神州的
ELISA
抗体?
分析说明书上列出了具体的保存建议。我们建议将所有抗体进行分装后保存在
-20
°
C
或以下,避免多次冻融,以免影响抗体活性。如果抗体未按说明书规定存储,我们将无法确保其性能。
义翘神州
ELISA
抗体的保质期是多久?
除非说明书中另有说明,我们的大多数抗体产品可以在
2
℃
-8
℃下保存
1
个月,而不影响检测活性;在
-20
℃
-70
℃条件下保存时,从签收日期算起,抗体可以稳定存放
12
个月(注:应避免反复冻融)。
义翘神州的
ELISA
抗体是如何供应的?
义翘神州的所有
ELISA
抗体均以液体形式提供。在环境温度下,产品在运输过程中保持稳定。我们在
-20
°
C
、室温以及
37
°
C
温度条件下,对每种抗体的稳定性和活性进行了测试,持续时间超过
7
天。在这三种条件下,抗体都具有同样的活性和稳定性。
义翘神州提供
酶联免疫吸附测定
(ELISA)
检测服务
,详情可以关注
https://cn.sinobiological.com/services/elisa-service
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