仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯
立即体验
APP内打开
回版面
评论
收藏
点赞
拍砖
举报
取消
发布
当前位置:
仪器社区
>
生命科学仪器
>
生命科学仪器综合讨论
>
帖子详情
蛋白纯化常见问题解析
Ins_bf0c01c3
2024/02/23
私聊
生命科学仪器综合讨论
蛋白纯化
是生物学实验中的关键环节,旨在从复杂的生物样本中分离和提纯出目标蛋白质。然而,在蛋白纯化的过程中,研究人员常常会遇到各种问题和挑战。这些问题可能源于样本的复杂性、蛋白质的特性,或是纯化技术的局限性。为了成功地进行蛋白纯化,理解并解决这些常见问题至关重要。下面是关于蛋白纯化的相关问题解析,希望对你有帮助:
一、蛋白质的纯化技术有哪些?
①沉淀法
②电泳
在克隆基因表达产物的检测分析过程中,电泳是常用的方法,但在纯化蛋白时,通常都不采用电泳的方法。由于某些特殊的目的,需要用聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化蛋白质,常用下述方法进行:
①从电泳后的凝胶上切下所需的相应条带,将凝胶压碎,用缓冲液浸泡,使其中的蛋白质扩散出来,从而获得纯化的蛋白质。此法简单但回收率低。②将电泳后的凝胶用电洗脱的方法使蛋白质从凝胶转移到溶液中,从而达到纯化的目的。此法快速,回收率高,但需要特殊的电泳装置。
③色谱法:
色谱法(
chromatography
)是蛋白纯化中最常用的一种方法,这种方法既可以制备大量的纯化蛋白质,又可以保持蛋白质的生物学活性。色谱的种类很多,可分为常规色谱和高效
液相色谱
(
high-performance liquid chromatography,HPLC
)。凝胶过滤色谱、离子交换色谱、亲和色谱等均为常规色谱法。
HPLC
包括反相高效
液相色谱
(
reversed-phase HPLC,RP-HPLC
)、离子交换高效
液相色谱
(
ion exchange HPLC
)等。根据目标蛋白性质的不同可选用相应的色谱分离技术纯化蛋白质。
二、什么是最好的蛋白质纯化方法?
常见的蛋白质纯化方法包括色谱法(如凝胶过滤、离子交换和亲和色谱)、电泳法(如
SDS-PAGE
和
Native-PAGE
)以及沉淀法(如盐析和有机溶剂沉淀)。每种方法都有其独特的优缺点和适用范围。
例如,凝胶过滤色谱适用于大规模纯化,能够基于蛋白质的分子量进行分离;离子交换色谱则适用于根据蛋白质的电荷差异进行分离;而亲和色谱则特别适用于那些与特定配体有高亲和力的蛋白质。电泳法则更适用于分析蛋白质的纯度或分离特定亚型的蛋白质。
综合考虑,我认为最好的蛋白质纯化方法应该是结合了多种纯化技术的综合方案。这种方案可以根据目标蛋白质的具体性质,灵活选择和应用不同的纯化技术,以达到最高的纯度和分离效率。此外,自动化和智能化的纯化系统也是未来的发展趋势,它们能够减少人为操作误差,提高纯化的稳定性和可重复性。
总之,选择最佳的蛋白质纯化方法需要综合考虑多种因素,并可能需要根据实际情况进行调整和优化。
三、蛋白质纯化的一般策略是什么?
①纯化技术的选择和组合:
这种组合的目的是发展出一条最快的方法来获得所需纯度的产品。对于任何色谱分离来说,不同的技术在回收率、分辨率、速度和容量方面的表现都各不相同。我们可以对一种技术进行优化,使其专注于其中一个参数;例如分辨率要在速度和容量两个参数之间达到最佳。
分辨率是通过技术的选择和色谱基质产生窄峰的效率来实现的。一般来说,此时目标蛋白和杂质具有非常相似的性质,分辨率是最难实现的。
②标签蛋白的纯化
:
在蛋白中添加标签可以使蛋白具有它本来不具有的结合亲和力。通常重组蛋白是混合物中唯一具有这种亲和力的蛋白,有助于蛋白分离。最常见的标签是对镍或钴离子有亲和力的组氨酸标签(
His
标签)。因此,我们通过将镍离子或钴离子固定在树脂上,可以创建与组氨酸标签蛋白特异性结合的亲和介质。
③评估纯化产量:
通常使用
SDS PAGE
监测纯化过程中的不同步骤。这一方法只能粗略地测量混合物中不同蛋白的量,并且无法区分具有相似分子量的蛋白。为了评估多步纯化的过程,必须将特定蛋白的量与总蛋白的量进行比较。
四、蛋白质纯化的色谱技术有哪些不同?
以下是几种常见的蛋白质纯化色谱技术及其特点:
凝胶过滤色谱(
Gel Filtration Chromatography
):也被称为尺寸排阻色谱,它主要根据蛋白质的分子量和形状大小来分离蛋白质。这种技术使用多孔的球形颗粒作为固定相,允许小分子量的蛋白质进入孔中并长时间滞留,而大分子量的蛋白质则不能进入孔中,因此会更快地洗脱出来。这种方法的优点在于设备简单、操作方便,且适用于分离纯化蛋白质、核酸、多糖等多种物质。
离子交换色谱(
Ion Exchange Chromatography
):这种技术是基于蛋白质与离子交换剂的亲和力来分离蛋白质的。离子交换剂上的带电基团与蛋白质表面的带电基团相互作用,从而实现蛋白质的分离。这种方法适用于分离具有不同电荷或电荷密度的蛋白质。
亲和色谱(
Affinity Chromatography
):亲和色谱是一种高度特异性的分离方法,它利用生物分子之间的特异性亲和作用来分离目标蛋白质。通常,亲和色谱使用一种与目标蛋白质有高度亲和力的配体作为固定相,当目标蛋白质流经色谱柱时,会与配体结合,从而实现分离。这种方法具有高分辨率和高选择性的优点,特别适用于分离含量极低或性质不稳定的蛋白质。
总的来说,不同的色谱技术各有优缺点,选择哪种方法取决于目标蛋白质的性质、纯化的要求以及可用的设备和技术。在实际应用中,可能需要根据实际情况将不同的色谱技术组合使用,以达到最佳的纯化效果。
义翘神州提供
重组蛋白表达纯化服务
,详情关注:
https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service
义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索
“义翘神州”与我们取得联系。
相关话题
1
安全使用液氮罐的五大要点是什么?
2
如何判断液氮罐中液氮的剩余量?
3
杜瓦瓶压力过高不能泄压是怎么回事
4
不锈钢杜瓦瓶使用寿命能达到多久?
5
流式细胞仪检测细胞增殖方法有哪些?
近期热榜
赛默飞实验室产品焕新计划有奖调研!
【七月征文】不一YOUNG实验“猿”
下周三开幕,iCS2024光谱大会,报名可看回放!
色谱耗材品限时大促,火热进行中!
热门活动
【七月征文】不一YOUNG实验“猿”
甄选国优仪器,助推设备更新
猜你喜欢
最新推荐
热门推荐
更多推荐
数控加工微流控芯片材质的选择比较和说明
原创
2016/10/19
【原创】第一次用六一电泳仪做蛋白电泳时出的chou
2007/01/14
Cell Press中国专刊:具有中国特色的肿瘤靶向治疗
分享
2012/01/07
【求助】请教国产的酶标仪有哪些品牌啊?
2007/07/24
【原创】溶剂瓶子、硅胶柱
2010/10/14
生物实验室废液处理
讨论
2011/08/17
【分享】睾丸激素增加社会警惕性
2010/05/26
【前沿领域】“病原微生物检测技术与进展”网络会议,邀您免费参会!
分享
2021/03/09
【我们不一YOUNG】第一次做生物实验
原创
2024/07/08
【我们不一YOUNG】蛋白质浓度测定方法大全
原创
2024/07/06
【我们不一YOUNG】HTS酶抑制剂筛选的流程介绍
分享
2024/07/05
太空微重力环境下癌症药物研究系统进口航空航天随机定位微重力模拟仪AJ001X
分享
2024/07/05
弱光成像或体内发光实验Atik TE科研制冷CCD相机
原创
2024/07/05
【我们不一YOUNG】结缘仪器,一起结缘,与仪器信息网一起成长
原创
2024/07/01
心血管检测仪打开后出现ch375dll.dll电脑丢失怎么办
已应助
2024/07/01
出售贝克曼DXC800生化分析系统
原创
2024/06/21
‘有奖问答’对错题’:用抽样方案(30,0)对产品批进行连续验收,当批不合格品率为1%时,方案的接收概率为73.97%,则平均检出质量为( )。
讨论
2024/07/05
多人主检的报告,检测审核应该怎么签字
求助
2024/07/05
CNAS:CL01-G001变更
求助
2024/07/05
EI源的灯丝镉厂家通用吗?
求助
2024/07/03
‘有奖问答’对错题’:某仪器零件的长度X和质量Y的相关系数为0.68,改进后长度缩短0.2厘米,质量低0.5克,新零件的长度和质量的相关系数为( )
讨论
2024/07/02
关于发布CNAS-CL01-G001:2024《检测和校准实验室能力认可准则的应用要求》及其过渡政策的通知
分享
2024/07/04
IEC62321-6方法验证
求助
2024/07/06
PE 的火焰原子吸收
求助
2024/07/02
糖区数据库
求助
2024/02/23
噪音检测规范选择适用
已应助
2024/02/23
2024年全国象棋业余棋王赛江苏赛区在金湖县吕良小学打响分赛区预选赛“第一枪”
原创
2024/02/23
抗体与蛋白的区别?抗体蛋白结构解析
资料
2024/02/23
揭秘抗组蛋白抗体:健康守护者还是疾病信号?
资料
2024/02/23
今天太阳也很好
原创
2024/02/23
ICP-OES
已应助
2024/02/23
【云唐仪器】食品二氧化硫检测仪主要应用于哪些行业
仪器微课堂
2024/02/23
品牌合作伙伴
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器(上海)有限公司(PerkinElmer)
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁
举报帖子
执行举报
点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...