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细胞爬片的操作方法以及技巧

油条豆浆

2024/10/10

前处理综合讨论

在医学生物研究中，免疫荧光检测等需用到细胞爬片。现有的细胞爬片多采用表面平整、光滑的透明玻璃玻片。但在做免疫荧光检测时，为了节约抗体，需免疫组化笔在爬片上进行范围的圈定，将抗体加入划定区域，免疫组化笔中的疏水成分阻滞抗体溢出所圈定的范围，从而达到节约抗体的目的。细胞爬片是细胞培养中比较经常会用到的，现将自己操作的一些方法与技巧拿与大家分享。

　　细胞爬片的特点:

　　1.玻片表面经过TC处理，双面均可使用。

　　2.γ射线灭菌，保证无菌。

　　3.使用便捷，只需打开包装，将爬片放入孔板内，将细胞悬液滴到爬片上即可培养。

　　4.爬片厚度为0.17mm，直径为8mm/14mm/20mm/25mm.分别适用于48孔细胞培养板/24孔细胞培养板/12孔细胞培养板/6孔细胞培养板。

　　5.吸附：该玻片表面具有阳离子电荷，可以通过静电作用吸附冰冻切片组织或细胞，使之粘附在玻片上，进而在玻璃和切片组织之间形成共价键.因此，无需粘黏剂或者蛋白包被，该玻片也能牢固的粘附切片或细胞。

爬片的准备:

　　1、爬片可用一般的盖玻片，也可用专用爬片;

　　2、应用盖玻片，可根据自己的需要剪裁成合适的大小，以备置于6孔板、12孔板或24孔板;

　　3、将剪裁好的爬片，置于浓硫酸中浸泡并过夜，第二天先用自来水冲洗20遍，再用三蒸水冲洗3遍(个人认为主要目的是冲洗干净就可以了)，放在饭盒或者培养皿(一定是玻璃的哦，要不然就……)中烘干后进行高压消毒。

　　培养板的准备:

　　1、泡酸过夜

　　2、冲洗，烘干(1、2步骤与前大致相同)

　　3、放入超净工作台用紫外线照1～2小时就可以用了(在照之前可以将爬片一并放入，若细胞贴壁能力不强，可经多聚赖氨酸浸片后放入。贴壁能力强的话，就可以省略了，进行紫外线消毒)

　　注：此步自己的经验是爬片可以先浸入消毒后的PBS内，紧接着放入培养板内。目的：浸过PBS的爬片依靠表面的液体，可以用培养板孔底贴和紧密，以利于细胞长到爬片上。(自己刚开始做的时候，经常就是细胞全都长在了爬片与培养板之间，爬片上细胞罕见。)

　　细胞爬片:

　　1、胰酶消化细胞后计数

　　2、根据自己的需要选择合适的细胞密度种入培养板内即可

　　3、第二天即可进行干预措施

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