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【原创】俺写的导数光谱论文，欢迎大家指点！！！

初学者&九点虎

2007/07/25

紫外可见分光光度计（UV）

论文
二阶导数光谱法测定酸奶中的纳他霉素的含量
周玉虎许国庆
(北京奶牛中心乳品质量监督检验站 100085）
摘要:本文以甲醇和醋酸进行萃取,采用二阶导数光谱法测定纳他霉素.含量.纳他霉素的检出限为0.0986mg/kg,回收率在96%-99%之间.并优化了光谱采集因素,有效的消除了干扰离子对测定的影响.本法检出限低,回收率高,干扰小,适合于酸奶中纳他霉素的测定.
关键词：纳他霉素酸奶二阶导数光谱
　　纳他霉素（Natamycin）是一种无臭无味的结晶状粉末，呈白色至奶油色，含3分子结晶水，熔点为280 ℃。分子式C33H47NO13，相对分子质量为665.73。纳他霉素微溶于水，可溶于稀盐酸及冰醋酸等。分子中含有1个碱性基团和1个酸性基团，为两性物质，等电点为6. 5，在pH值<3或>9时，溶解度增大，但同时活性会有所降低。纳他霉素属多烯大环内酯类抗真菌剂，具有专一性抑制酵母和霉菌的作用，已被超过32个国家批准使用。我国卫生部批准将其纳入GB2760-1996，并于1997年7月1日开始实施，可用于干酪、广式月饼和糕点等产品的生产，残留量不得超过10 mg / kg。
目前纳他霉素的分析方法主要有比色分析法、元素分析法、微生物分析法、色谱分析法、滴定分析法、电泳分析法。本文采用二阶导数光谱法测定酸奶中纳他霉素，方法简便，准确性高等优点。
1仪器与试剂
1.1仪器
UV-2550型紫外可见分光光度计（岛津有限公司）
1.2试剂
1.2.1冰乙酸
1.2.2甲醇
1.2.2纳他霉素标准储备液：称取纳他霉素标准品10.0mg ,用冰乙酸+水=5：40的溶液溶解，定容到100ml,其浓度为100ug/ml。
1.2.3纳他霉素标准使用液：吸取纳他霉素标准储备液10ml 于100ml容量瓶中，,用冰乙酸+水=5：40的溶液定容至刻度,其浓度为10ug/ml。
以上试剂均为分析纯和GB/T6682中一级水.
2试验方法
2.1方法选择
用260~350nm波长对标准品和样品进行扫描，其谱图如下:

图1标准品谱图图2样品图

图3 标准品二阶导数图图4样品二阶导数图
由图1-4可看出,二阶导数光谱有效的消除了叠加在吸收光谱上的背景干扰;并采用光谱识别效应,将样品图中存在的肩峰有效的分离出来,从而达到定性定量的目的.
2.2标准曲线的制作
分别取1、2、3、4、5ml纳他霉素标准使用液于10ml具塞比色管中，加冰乙酸+水=5：40的溶液调至8ml，调PH6~7，定容于10ml。
2.3样品测定
称酸奶样品2.5g（精确到0.0001g）, 加甲醇16mL,加冰乙酸2mL，加水定容于25ml,离心8min后测定。
3结果与讨论
3.1扫描速度对光谱采集的影响因素
采用了低速(very slow)，慢速(slow)，中速(medium)，高速(fast)四种速度进行扫描,采样间隔0.5,狭缝宽度2.0nm,氘灯转换波长360nm,扫描方式为自动,结果见表1:
表1 扫描速度结果比较
扫描方式扫描时间(S) 最大吸收处波长(nm) 谱图颜色
低速(very slow) 64 304.002 绿
慢速(slow) 56 303.994 紫
中速(medium) 28 303.975 棕
快速(fast) 16 303.461 蓝
取最大吸收波长处光谱图,如图5,比较如下:

图5 不同扫描速度结果图
以上数据表明:在没有特别精确要求下,中速、慢速、低速扫描基本没有区别,但和快速扫描的区别比较大。从扫描时间和氘灯使用寿命等因素考虑，建议采用中速扫描。
3.2采样间隔对光谱采集的影响因素
采用0.05为采样间隔时，仪器以0.05nm为单位进行扫描，即自动在1nm范围内插入1/0.05=20个点。其它雷同。仪器条件：扫描速度为低速，狭缝宽度2.0nm,氘灯转换波长360nm,扫描方式为自动,结果见下表2:现比较如下：
表2采样间隔结果比较
采样间隔扫描时间（S）最大吸收处波长(nm) 谱图颜色
0.05 580 303.55 黄
0.1 294 303.50 红
0.2 146 303.60 绿
0.5 124 303.50 黑
1.0 34 303.00 白
2.0 20 304.00 蓝
取最大吸收波长处光谱图,如图6,比较如下:
从上表可以看出 , 0.05-0.5的采样间隔对最大吸收波长基本没有影响，但1.0和2.0的采样间隔则影响比较大。从图上可以看出,采用0.05、0.1、0.2、的采样间隔,其谱图平划,而0.5、1.0、2.0的采样间隔,其谱图都不是非常平滑。所以，在没有特别精确要求下, 采用0.05-0.2

图6 不同采样间隔结果图
的采样间隔均可，但0.5、1.0、2.0的采样间隔则对测定结果有一定影响。从扫描时间和氘灯使用寿命等因素考虑，建议采用0.2的采样间隔。
3.3精密度试验
对三个不同的酸奶样品,进行了7次平行测定,结果见表2，其相对标准偏差在0.76%~2.44%之间,符合测定要求。
表2 精密度试验结果
样品名称测定值(mg/kg) 平均值(mg/kg) RSD(%)
酸奶1 0.268,0.284,0.272,0.282,0.291,0.275,0.286 0.280 0.76
酸奶2 0.321,0.385,0.364,0.377,0.329,0.384,0.375 0.362 2.44
酸奶3 3.548,3.007,3.264,3.398,3.452,3.388,3.671 3.390 1.97
3.4准确度试验
对三个不同样品进行了加标回收试验,其结果见表3,加标回收率在94.07%~100.26%之间。
表3 样品测定及加标回收试验
样品编号本底值(mg/kg) 加标量(mg/kg) 测定值(mg/kg) 回收率
(%)
酸奶1 0.280 0.5 0.781 100.26
酸奶2 0.362 0.5 0.832 94.07
酸奶3 3.390 2.0 5.343 97.65
4结论
试验表明：本方法准确性高，重现性好，操作相对简单，适用于乳与乳制品中纳他霉素的测定。

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不错，能做到0.1ppm，阳性样品比例大概多少，酸奶为3个多ppm。多么，是否因为控制酒精阳性乳也需要或可以加这个抗生素呀。

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初学者&九点虎

第6楼2007/08/19

阳性样品还的不少,不过不在酸奶的产品标准和卫生标准所检测的范围内,我觉得这也是国标的一个大漏洞
纳他霉素主要抑制真菌,而酒精阳性乳主要是杂菌和体细胞多,估计可以吧,没有实验过,我这里还有标准品呢,你要么?
ruojun 发表:不错，能做到0.1ppm，阳性样品比例大概多少，酸奶为3个多ppm。多么，是否因为控制酒精阳性乳也需要或可以加这个抗生素呀。

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闲鹤野云

第7楼2007/08/19

谢谢虎老弟。酶标仪可以测么，有没有试剂盒。到时给我留些。
zhouyuhu 发表:阳性样品还的不少,不过不在酸奶的产品标准和卫生标准所检测的范围内,我觉得这也是国标的一个大漏洞
纳他霉素主要抑制真菌,而酒精阳性乳主要是杂菌和体细胞多,估计可以吧,没有实验过,我这里还有标准品呢,你要么?

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jisuxinren

第8楼2007/08/19

怎么看不到图啊！很想学习一下啊！

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初学者&九点虎

第9楼2007/08/20

您下载附件就可以看到图了，不好意思
jisuxinren 发表:怎么看不到图啊！很想学习一下啊！

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初学者&九点虎

第10楼2007/08/20

谢谢虎老弟。酶标仪可以测么，有没有试剂盒。到时给我留些。[/quote]

酶标仪不太清楚，我们这里有试剂盒，可以做抗生素，其他的我也不太明白，不好意思

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