使用紫外-可见光谱法快速测定双链核 酸的解链温度

2024/01/09   下载量： 0 次

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应用领域 制药/生物制药
检测样本 预防类生物药品
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使用 Agilent Cary 3500 紫外-可见分光光度计以快速升温速率获得可重现的解链温度 (Tm ) 数据

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通过提高温度可以诱导双链核酸分离成单链。在一定温度下，碱基对之间的氢 (H)键会断裂。热解链实验利用了核碱基之间H 键数量的差异。例如，DNA 核苷酸的腺苷与胸腺嘧啶 (A=T) 之间以及鸟嘌呤与胞嘧啶 (GΞC) 之间的 H 键，或 RNA 中腺苷与尿嘧啶 (A=U) 和 G 与 C 碱基之间的H 键。由于 GΞC 核苷酸含有三个氢键，解离 GΞC 所需的热能大于双键碱基对。含有更多 GΞC 对的 DNA 和 RNA 将在更高的温度下解链。因此，解链温度 (T m )可以准确指示样品中的碱基对组成（GΞC与 A = T/U = T的比率）。


在核酸的药物发现、开发和生产过程中，Tm 通常被研究人员和制造商用作二级鉴定测试（QC 检查）。解链温度通常通过紫外-可见分光光度法测量，因为在核酸的最大吸收峰 260 nm 处，单链核酸的吸光度高于双链核酸[1]。以鲱鱼精子 DNA 为例，图 1 显示，与 25 °C 相比，260 nm处的吸光度在 90 °C 时明显更高。


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文献贡献者

安捷伦科技(中国)有限公司
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