【飞诺美色谱】LC/MS/MS检测血清中类固醇激素-Cleanert PEP

艾杰尔飞诺美

类固醇激素又称为甾体激素，是内分泌细胞分泌的高效能生物化学物质。它们在维持生命、调节机体物质代谢、促进性器官发育和维持生育等方面起着重要作用。

类固醇激素在体内的含量较低，对其准确定量具有重要意义。本实验采用Cleanert® PEP 96微孔板对血清样品进行净化，建立了血清中类固醇激素的检测方法，该方法适合高通量样品前处理。

目标物信息

表1 化合物结构

材料及仪器

Cleanert PEP 96微孔板(5mg/1mL)；96孔板正压装置；96位接收板；Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm，150 Å）；API 4000+。

样品处理方法

样品预处理

100μL血清样品与100μL 含有1%甲酸的甲醇/水溶液混合（50/50，v/v）

SPE过程

活化：依次用200μL甲醇、200μL水活化；

上样：将预处理过的血清样品上样至96孔板中；

淋洗：加入400μL甲醇/水(35/65, v/v)用于淋洗样品中的干扰物；

洗脱：加入200μL 1%甲酸甲醇，用96位收集板收集洗脱液用于LC-MS/MS检测。（将洗脱液氮吹浓缩可获得更低的检测限）

仪器检测条件

HPLC条件

色谱柱：Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm，150Å）

流速：200μL/min

柱温：30℃

进样量：3μL

流动相：0.1%甲酸水/0.1%甲酸乙腈（ 40/ 60，v/v）

质谱条件

扫描模式：电喷雾电离正模式

采集模式：多反应监测（MRM）

表2 参数信息

结果

图1 30ppb类固醇激素标准溶液色谱图

图2 血清样品色谱图

图3 血清加标样色谱图（浓度为30ppb）

表3 加标回收率数据

加标浓度	醛固酮	氢化可的松	睾酮	脱氢表雄酮	黄体酮
30ppb	85.9%	87.0%	105.5%	110.6%	97.7%

结论

在临床检验中类固醇激素是一个难点。本实验使用Cleanert® PEP 96孔板提取血清中的类固醇，加快了检测速度，相较免疫法提高了最低检测浓度，回收率高于85%，可满足实验室检测相关物质的需要。

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