【飞诺美色谱】化妆品中7种局麻药的分析方法

局部麻醉药（localanaesthetics），是一类能在用药局部可逆性的阻断感觉神经冲动发生与传递，简称“局麻药”。可卡因由于吸收后毒性大，使用受到限制。人工合成低毒性的普鲁卡因后，使用范围不断扩大。利多卡因则是酰胺类局麻药的典型。目前常用局麻药可分为酯类和酰胺类两大类，芳酸酯类如普鲁卡因，苯佐卡因，丁卡因；酰胺类如利多卡因；

普鲁卡因和利多卡因二者能够竞争性地与神经膜脂蛋白牢固结合，阻碍钠离子渗入及神经纤维的传导，临床上用于浸润麻醉、阻滞麻醉、腰椎麻醉、硬外麻醉和局部封闭化，它们的用量必须适当控制，如果过量会引起皮疹、头昏、眼花、眩晕，重者还会引起震颤、恐慌、休克甚至死亡；苯佐卡因临床用做局部麻醉药，有良好的止痛、止痒作用，主要用于创面、溃疡面、粘膜表面和痔疮麻醉止痛和痒症，具有稳定性好、起效快维持时间长和副作用小等优点；丁卡因具有吸收快、作用强、毒性大等特点。目前化妆品中添加防腐剂、激素、抗生素等等，重金属超标事件时有发生，对人的身体健康造成了一定的危害，而化妆品已成为人日常生活必需品，化妆品安全日益受到关注，健全化妆品检测已迫在眉睫，故本实验建立了化妆品中7种局麻药的检测方法。

仪器、试剂与材料

高效液相色谱柱：VenusiL XBP C18（L）规格5 μm ，150 Å；4.6 × 250 mm ;SPE小柱：Cleanert PCX 规格60 mg/3 mL

1%三氯乙酸溶液;1%甲酸甲醇溶液;5%氨水甲醇溶液;尼龙针式过滤器：13 mm，0.45 μm

标准储备液：称取一定量利多卡因、普鲁卡因、丁卡因、普鲁卡因胺、氯普鲁卡因、辛克卡因、苯佐卡因，分别用甲醇溶解定容，配制成1.0 mg/mL的溶液

标准工作液：分别取250 μL上述7种局麻药单标，用甲醇稀释定容至10 mL，配制成25 μg/mL溶液

样品制备

提取

霜类：称取0.5 g霜样品(精确至0.01 g）于离心管中，加入200 μL 25 μg/mL局麻药标准工作液，涡旋混合1 min，加入8 mL 1%三氯乙酸和2 mL乙腈，振荡提取1 min，超声10 min，8000 r/min离心5 min，转移上层清液至另一离心管，待净化。

精油类：称取0.5 g霜样品(精确至0.01 g）于离心管中，加入200 μL 25 μg/mL 局麻药标准工作液，涡旋混合1 min，加入2 mL乙腈饱和正己烷溶液，振荡提取1 min，超声10 min；加入8 mL 1%三氯乙酸和2 mL乙腈，振荡提取1 min，8000 r/min离心5 min，转移上层清液至另一离心管，待净化。

净化

取PCX（60 mg/3 mL）小柱，依次用3 mL甲醇、5 mL1%三氯乙酸活化小柱，将上述待净化样品以1.0 mL/min通过小柱，再依次用3 mL 1%三氯乙酸、3 mL 1%甲酸甲醇溶液淋洗小柱，抽干，最后用10 mL 5%氨水甲醇溶液洗脱小柱，收集洗脱液，40℃氮气浓缩至近干，用1 mL甲醇：水（1:1，体积比）溶解残留物，过0.45 μm尼龙针式过滤器，样品供HPLC检测。

注：霜类提取样品上样液、淋洗液在0.25 MPa负压下通过小柱

液相检测条件

色谱柱：VenusiL XBP C18（L）规格5 μm ，150 Å；4.6 × 250 mm

流动相A：20 mmoL/L磷酸氢二纳（用磷酸调节pH至7.0）；

流动相B：甲醇

A：40%流动相A，60%流动相B；B：20%流动相A，80%流动相B

波长：220 nm

进样量：20 μL

流速：1.0 mL/min

柱温：30℃

梯度：

结果与讨论

实验结果

表1. 精油基质加标回收实验数据（添加水平10 μg/g）

表2. 霜基质加标回收实验数据（添加水平10 μg/g）

博纳艾杰尔产品应用案例

液相色谱图

讨论

1) 对比了Cleanert PCX 不同规格小柱150 mg/6 mL与60 mg/3 mL对目标物的吸附情况，发现使用Cleanert PCX 60 mg/3 mL，可以满足实验要求；

2) 对比了洗脱溶剂不同强度5%氨水甲醇溶液与10%氨水甲醇溶液对实验的影响，发现在用10%氨水甲醇溶液作为洗脱溶剂时，苯佐卡因受影响较大；用5%氨水甲醇溶液作为洗脱溶剂，对目标物影响均较小，且满足实验要求；

3) 考察了7种局麻药在碱性和中性条件下的稳定性，局麻药混标溶液在5%氨水甲醇溶液放置1 h后，40℃氮气吹干，检测发现除苯佐卡因外，其他物质回收率均在80%以上，局麻药混标溶液在5%氨水溶液中用甲酸调节pH至中性后，普鲁卡因胺和氯普鲁卡因回收率为0%，苯佐卡因回收率只有40%；说明7种局麻药在5%氨水甲醇溶液碱性条件下较稳定。

4) 本文选择了精油和霜基质做7种局麻药加标实验，精油类样品除苯佐卡因外，其他回收率均在90%以上；霜类样品除苯佐卡因外，其他回收率均在70%以上；RSD值小于15%。

结论

本实验建立了7种局麻药的高效液相色谱检测方法，并结合固相萃取技术对化妆品中7种局麻药的含量进行了测定。对于加标量为10 μg/g的样品进行了检测，除苯佐卡因外其他回收率在70% ~ 120%之间，固相萃取方法稳定并且色谱柱检测重现性良好，说明本方法能够用于检测化妆中7种局麻药。

订货信息