【飞诺美色谱】化妆品中11种糖皮质激素的分析方法

艾杰尔飞诺美

2024/04/03 13:25

摘要：建立了固相萃取-液质联用对化妆品中泼尼松、泼尼松龙、氢化可的松、倍他米松、地塞米松等 11 种糖皮质激素同时检测的方法。化妆品样品用乙腈提取后，经 CLearnert PEP-2 SPE 固相萃取柱净化后，以 VenusiL ASB C18（3µm，150Å，2.1 × 150mm）为色谱柱，使用配有液相的 API 4000PLUS 三重四级杆质谱仪进行定量分析。11 种糖皮质激素线性范围，相关系数 r 均大于 0.999。在高低添加水平下，11 种糖皮质激素的平均回收率为 75%-120%；相对标准偏差均小于 13% 。

关键词：糖皮质激素；化妆品；固相萃取；液质联用

前言

糖皮质激素是临床常用的一类药物，对皮肤病有良好的消炎作用，可抑制纤维细胞增生，减少 5-羟色胺的形成，因此其在短时间使用对皮肤有一定的嫩白作用【 1 】。但长期使用则会发生皮肤变薄、毛细血管扩张、毛囊萎缩，一旦停用，皮肤就会发红、发痒，出现红斑、皮疹等。因此我国《化妆品卫生规范》【 2 】明确规定此类物质为禁用成分。目前糖皮质激素的检测多集中在药品中有效成分和尿液中糖皮质激素的检测【 3-7 】，化妆品中糖皮质激素的检测文献报道的较少。本文采用 CLearnert PEP-2 SPE 净化的方法，建立了一种化妆品中泼尼松、泼尼松龙、可的松、氢化可的松、甲基泼尼松龙、倍他米松、地塞米松、醋酸可的松、醋酸泼尼松、醋酸氢化可的松、曲安奈德 11 种糖皮质激素同时检测的方法。

实验方法

. 实验试剂和材料

糖皮质激素类药物标准品（详见表 1）

糖皮质激素类药物标准溶液配制

标准贮备液

分别精密称取适量的 12 种糖皮质激素标准品，用甲醇溶解定容，分别配制成 1000μg/mL 的贮备液。-20℃以下保存。

混合标准工作液

准确量取糖皮质激素类药物标准贮备液适量，用 20%乙腈水溶液稀释成适宜浓度的混合标准工作液，现配现用。

. 实验试剂的配置

10%亚铁氰化钾溶液：称量 2.3g K 4 Fe(CN) 6 •3H 2 O，用水溶解定容至 20mL；

20%乙酸锌溶液：称量 4.78g C 4 H 6 O 4 Zn•2H 2 O，用水溶解定容至 20mL；

定容液：量取 70mL 水和 30mL 乙腈，混匀后加入 100uL 甲酸混匀。

测定步骤

提取

霜膏类化妆品：称取 0.2 g 试样于 50mL 离心管，混匀。加入 3 mL 饱和氯化钠溶液，涡旋混合使样品分散，加入 2mL 乙腈，超声提取 5 min，8000 r/min 离心 5 min，吸取上层清液于另一 50 mL 离心管中，下层氯化钠溶液用 2mL 乙腈重复提取一次，合并二次乙腈提取液，往提取液加入 40mL 去离子水，混匀，加入亚铁氰化钾溶液 0.2mL，混匀，加入乙酸锌溶液 0.2mL，混匀，8000r/min 离心 10min，作为待进化液。

精油类样品：称取 0.5g 试样（精确至 0.01g）于 50 mL 离心管，混匀。加入 4 mL正己烷，涡旋混合使样品分散，加入 4 mL 50%乙腈水溶液，涡旋提取 2 min，8000 r/min离心 5min，吸取下层提取液，上层正己烷用 4 mL 50%乙腈水溶液重复上述提取步骤一次，合并二次 50%乙腈提取液，往提取液加入 36 mL 去离子水，混合，加入亚铁氰化钾溶液 0.1mL，混匀，加入乙酸锌溶液 0.1mL，混匀，8000r/min 离心 10 min，作为待进化液。

净化

将 PEP-2 固相萃取小柱接上固相萃取装置，小柱上端紧密连接一个 60 mL 装有筛板的上样管，小柱预先用 5 mL 甲醇、10 mL 水活化。将上述待净化液全部上样，待样品溶液自然流尽后，再用 10 mL 10%乙腈水溶液淋洗小柱，待清洗液自然流尽后，取下上样管，用吸球吹出小柱中的残留液。用 6mL 甲醇洗脱小柱，待甲醇自然流尽后，用吸球吹出小柱中的残留液，收集洗脱液于 40℃氮气吹干，用 1 mL 定容液溶解定容，过0.22 um 尼龙滤膜，待测。

液相色谱条件

色谱柱：VenusiL ASB C18，3μm，150 Å，2.1*150mm；

流动相：A 相：含 0.1%甲酸的水溶液；

B 相：含 0.1%甲酸的乙腈溶液；

梯度洗脱程序见表 4；

柱温：30℃；

进样量：10μL。

质谱条件

离子源：电喷雾离子源；

扫描方式：负离子扫描；

检测方式：多反应监测；

IS：-4500V；

GS1：55Psi；

GS2：55Psi；

TEM：550℃；

糖皮质激素类药物多反应监测的优化参数见表 5。

结果与讨论

净化条件的选择

目前文献报道的净化方法多选用聚合物基质的吸附性材料或硅胶基质的 ODS SPE小柱。本文选用 CLeanert PEP-2 SPE 小柱，实验结果表明其可同时对 11 种糖皮质激素有很好的吸附。

考察了不同体积分数 0%、5%、10%、20%、30%、40%、50%乙腈的水溶液的洗脱效果，结果表明使用 10%乙腈的水溶液，可保证 11 种糖皮质激素不被洗脱下来，所以最终选用 10%乙腈的水溶液做淋洗液，并且在上样之前要用水将乙腈的提取液稀释。

液相色谱柱的选择

在本文要同时检测的 11 种糖皮质激素中，可的松和氢化可的松、倍他米松和地塞米松为同分异构体，在反相液相色谱中比较难分离。通过比较不同 C18 的分离效果，最终选用 VenusiL ASB C18（3µm，150Å，2.1 × 150mm）为色谱柱，可保证 11 种糖皮质激素在 15min 内均达到基线分离。

线性关系和检出限

将浓度分别为 2、5、10、20 和 50µg/L 的混合标准溶液依次进样分析，以峰面积 Y对浓度 X（µg/L）拟合回归方程，结果见表 6。结果表明，11 种糖皮质激素分别在 2-50µg/L范围内呈线性，相关系数 r 大于 0.999，检出限（S/N=3）为

表 6 11 种糖皮质激素线性回归方程和检出限