一 背景 胆汁酸(bile acid, BA)为胆固醇的系列衍生物,体内约有 50%胆固醇是以胆汁酸形式 排泄,是体内清除胆固醇的重要途径。粪便中的胆汁酸经过复杂的肠道菌群解离作用已证实 主要为一级胆汁酸和次级胆汁酸。目前已有相关研究表明,粪便中胆汁酸的含量与肝脏疾病 进展程度相关,建立操作简便、可准确定量的样品前处理方法对临床相关研究具有重要意义。 本实验采用 Cleanert MAS-MAW 进行样品净化处理,考察胆汁酸在粪便样品中的加标 回收率,建立 SPE 方法对粪便样品进行净化处理。
二 目标物信息
三 材料及仪器 Cleanert MAS-MAW;PTFE 滤头;Cleanert M96 生物样品前处理仪;Cleanert V96 氮 吹浓缩仪;96 孔接收板;Venusil MP C18(2.1*150mm,3μm,100Å);API 4000+.
四 样品处理方法 4.1 样品预处理 称取 10mg 粪便样品至样品瓶中,并加入 3mL 甲醇,涡旋 2min,超声 15min,8000rpm 离心 5min,将上清液转移至干净样品瓶中,向样品残渣中再加入 3mL 甲醇,重复提取一次, 将上清液合并,并用 PTFE 过滤头进行过滤,将滤液于 45℃下氮吹干,使用 1mL 1%甲酸甲 醇/水(1:1,v/v)溶液重新溶解,待净化。 4.2 SPE 过程 活化:2ml 乙腈,2ml 3%甲酸水溶液 上样:将待净化液全部上样 淋洗:4mL 50%甲醇水,淋洗液弃去 洗脱:先用 2mL 甲醇进行洗脱,再用 2ml 三乙胺-水-甲醇混合液(2%-10%-88%)洗脱, 将洗脱液合并,在 40℃下氮吹干,残渣用 100μL 甲醇/水(7:3,v/v)溶解。 注:粪便样品中部分胆汁酸的含量较高,可将溶液进一步稀释再进行检测。
五 仪器检测条件 5.1 HPLC 条件 色谱柱:Durashell C18-AM(2.1*100mm,3μm,100Å) 流速:200μL/min 柱温:30℃;进样量:5μL
5.2 质谱条件 扫描模式:电喷雾电离负模式 采集模式:多反应监测(MRM)
六 结果
七 结论 本实验采用 Cleanert MAS-MAW 96 孔板对粪便样品中的胆汁酸进行高通量前处理。实 验结果表明 Cleanert MAS-MAW 能够有效除去粪便中的干扰物,对 8 种胆汁酸进行定量萃 取,绝对回收率范围为 83%~114%,可以满足日常对批量生物样品分析的需求。
八 订货信息表
【飞诺美色谱】水中 15 种多环芳烃的分析方法
【飞诺美色谱】大鼠血浆中芬太尼的分析方法
IVT转录过程中NTPs和帽子类似物残留的检测
【飞诺美色谱】卡马西平的分析方法
相关产品
关注
拨打电话
留言咨询