猪肉中齐帕特罗残留量的分析方法
AF10090
应用及技术服务部
摘要:本实验以 SN/T 2624-2010 为依据,采用固相萃取结合液相色谱-串联质谱(SPE-LC/MS/MS)
的方法,在多反应监测(MRM)模式下建立了猪肉中齐帕特罗的检测方法。样品中的齐帕特罗经
乙腈、异丙醇和柠檬酸缓冲液的混合溶液提取,Cleanert® PEP-2 串联 Cleanert® PCX 固相萃取柱
净化,Venusil® MP C18 色谱柱(2.1 × 50mm,3 μm,100 Å)分离,0.1%甲酸水︰0.1%甲酸乙
腈(95︰5, V/V)为流动相进行等度洗脱,外标法进行定量。结果表明,齐帕特罗添加量为 4.0 μg/kg
时,回收率在 90% ~ 110%之间,能够满足检测要求。
关键词:SPE-LC/MS/MS;齐帕特罗;Cleanert® PEP-2 SPE 柱;Cleanert® PCX ;Venusil® MP C18
色谱柱
前言
齐帕特罗(zilpaterol)属于 β2-肾上腺素受体激动剂,是一种与克伦特罗(俗称瘦肉
精)、莱克多巴胺、沙丁胺醇等具有同样生理效应的生长促进剂,属于违禁药物。但
其化学结构却与常见的 β-兴奋剂不同,其毒性也是莱克多巴胺的 15 倍。然而,随着
相关兽药监管部门对克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等常见 β-兴奋剂打击力度的
增大和相关检测技术的日趋成熟,齐帕特罗极有可能被不法分子利用,成为食品安
全的潜在杀 手。SN/T 2624-2010《 动物源性食品中多种碱性药物残留量的检测方法
液相色谱-质谱/质谱法》规定受体激动剂最低检测限为 0.5 μg/kg。
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
AB SCIEX API 4000+液相质谱联用仪
试剂材料
甲醇、氨水、乙腈、甲酸均为色谱纯;实验用水为超纯水;柠檬酸为分析纯; 博纳艾杰尔产品应用案例
齐帕特罗标准品(纯度大于 98%),甲醇溶解并稀释;
柠檬酸缓冲液:称取 10.5 g 溶解于 500 mL 水中,用氨水调节 pH 至 2.5;
甲醇-氨水(95/5,V/V);
水-甲醇(95/5,v/v);
0.1%甲酸水-甲醇溶液(95/5,v/v);
一次性无菌注射器;尼龙针式过滤器(0.22 μm,直径 13 mm);
Cleanert® PEP-2 固相萃取柱:60 mg/3mL;
Cleanert® PCX 固相萃取柱:60 mg/3mL
样品制备
样品提取
准确称取 5 g 均质猪肉试样于 50 mL 离心管中,加入 30 mL 乙腈,2 mL 异丙醇
和 10 mL 柠檬酸缓冲液,涡旋混合提取 3 min,8000 r/min 离心 3 min,上清液转移
至 250 mL 梨心瓶中。重复上述提取操作,合并提取液,加入 6 mL 异丙醇后,在 40℃
旋蒸浓缩至 5 mL 左右,转移浓缩液至 50 mL 离心管中,并用 5 mL 柠檬酸缓冲液润
洗梨心瓶,合并洗液,8000 r/min 离心 10 min,取清液待净化。
样品净化
取 PEP-2 (60 mg/3 mL) 和 PCX (60 mg/3 mL),用转接头按从上到下的顺序串联
好,依次用 3 mL 甲醇、3 mL 水、3 mL 柠檬酸缓冲液活化小柱,待净化液以 0.5 mL/min
流速全部过柱,再依次用 3 mL 柠檬酸缓冲液、3 mL 水、3 mL 水-甲醇(95/5,V/V)淋
洗小柱,抽干 5 min,最后依次用 4 mL 甲醇、6 mL 甲醇-氨水(95/5,V/V)洗脱小柱,
合并收集洗脱液,40℃氮气浓缩至干,加入 1.0 mL 0.1%甲酸水-甲醇溶液(95/5,V/V)
振荡溶解残渣,过 0.22 μm 尼龙针筒过滤器,待测。
注:上述操作步骤可在 Qdaura®卓睿全自动固相萃取仪上完成。
实验条件
液相条件
色谱柱:Venusil® MP C18,2.1 × 50mm,3 μm,100 Å;
流动相:A相-0.1%甲酸水溶液,B相-0.1%甲酸乙腈;
柱 温:30℃;
进样量:10 µL;
流速:300 µL/min;
等度洗脱:0~10 min,A︰B = 95︰5 (V/V)。
质谱条件
离子源:电喷雾离子源;
扫描方式:正离子扫描;
电喷雾电压:4500 V;
雾化气压力:40 psi;
气帘气压力:15 psi;
辅助气压力:40 psi;
离子源温度:400℃;
采集方式:多反应监测(MRM);
Q1、Q3均为单位分辨率;
质谱参数(见表1)
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结果与讨论
实验结果
由表 2 可知,采用固相萃取结合液相色谱-串联质谱法检测齐帕特罗加标回收率
在 90% ~ 110%之间,RSD 值小于 14%,能够满足检测要求。由图 1 和图 2 可看出经 Cleanert® PEP-2 串联 Cleanert® PCX 固相萃取柱净化,采用 Venusil® MP C18 色谱柱检测得到的齐帕特罗峰形良好,且保留时间稳定。
添加图片注释,不超过 140 字(可选)
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结论
本实验建立了齐帕特罗残留量的 LC-MS/MS 检测方法,并结合固相萃取技术对
猪肉中齐帕特罗的含量进行了测定。对于加标量为 4.0 μg/kg 的样品进行了检测,回
收率在 90% ~ 110%,符合国标要求,固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好,说
明本方法能够用于检测动物源性食品中齐帕特罗的残留量。
附:相关产品
产品名称 规格描述 包装数量 订货号
Venusil® MP C18 3 μm,100Å;2.1 × 50mm 1 支 VA930502-0
Cleanert® PEP-2 60 mg/3 mL 50 支/pk PE0603-2
Cleanert® PCX 60 mg/3 mL 50 支/pk CX0603
保护柱套 适用于 4.6 × 10 mm 和
2.1 × 10 mm
1 支 SH-100
直联式保护柱芯 3 μm,100Å;2.1 × 10mm 4 /pk VA950102-0S
1.5 mL 样品瓶 短螺纹透明带书写处
32 × 11.6 mm
100/pk 1109-0519
1.5 mL 样品瓶盖
9 mm 中心孔蓝盖,红色
橡胶/米色 PTFE 隔垫
45°Shore A; 1.0 mm
100/pk 0915-1819
Qdaura®卓睿全自动固相
萃取仪
24 位,四通道 1 台 SPE-40
氮吹仪 15 位 1 台 NV15-M
针式过滤器(Nylon) 单膜,13 mm,0.22 μm 200 个/包 AS021320
一次性注射器 2 mL 无针头 100 支/包 LZSQ-2ML
乙腈 UV 级 4 L/瓶,色谱纯 4×4 L/箱 015-4
甲醇 4 L/瓶,色谱纯 4×4 L/箱 S232-04
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