摘要：本实验采用高效液相色谱法结合紫外检测器，参照中国药典 2015 年版 二部克林霉素磷
酸酯有关物质项下的方法，选择 Venusil® C18 Plus(5 μm，120 Å，4.6 × 250 mm) 色谱柱对克林
霉素磷酸酯乳膏有关样品进行了测定。结果表明：在波长为 210 nm，流动相为磷酸缓冲溶液、
90%乙腈甲醇梯度洗脱时，Venusil® C18 Plus 色谱柱可实现克林霉素磷酸酯峰与相邻杂质峰的
分离，可满足药典要求。
关键词：高效液相色谱法；紫外检测器；克林霉素磷酸酯；Venusil® C18 Plus 色谱柱
前言
克林霉素磷酸酯属于抗生素类药物，人体吸收后可水解为克林霉素，发挥抗菌作
用。本实验以克林霉素磷酸酯乳膏制成供试品溶液，参照 Ch.P2015 版二部克林霉素磷
酸酯有关物质项下方法进行测试。
表 1.克林霉素磷酸酯样品信息
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
高效液相色谱仪，紫外检测器；
试剂材料
屈臣氏水；乙腈、甲醇为色谱纯； 浓氨水、磷酸均为分析纯；
磷酸缓冲溶液：取磷酸 3.5 mL，加水 1000 mL 和浓氨水 2.5 mL，并用浓氨水调节
pH 至 3.9）；
克林霉素磷酸酯乳膏：由某制药公司提供；
高效液相色谱柱：Venusil® C18 Plus；5 µm，120 Å；4.6 × 250 mm。
样品制备
克林霉素磷酸酯乳膏供试品溶液：精密称取样品 1.8 g，加入 10 mL 正己烷，55℃
水浴加热 10 min，加入 10 mL 稀释剂(pH3.9 磷酸缓冲溶液︰甲醇=2︰8) ，55℃水浴加
热 10 min 直至溶解，振摇 15 min 后静置分层，取下清液离心 10 min，过滤取续滤液即
得供试品溶液；
克林霉素磷酸酯乳膏空白溶液：取空白辅料样品，同供试品溶液制备方法。
色谱条件
色谱柱：Venusil® C18 Plus；5 µm，120 Å；4.6 × 250 mm；
流动相 A：磷酸缓冲溶液︰90%乙腈甲醇=92︰8(v/v)；
流动相 B：磷酸缓冲溶液︰90%乙腈甲醇=52︰48(v/v)；
流 速：1.2 mL/min；
波 长：210 nm；
柱 温：35℃；
进样量：25 µL；
梯 度：
表2.克林霉素磷酸酯梯度洗脱程序
结果与讨论
本实验参照中国药典 2015 年版 二部克林霉素磷酸酯有关物质项下检测方法，采用
Venusil® C18 Plus 色谱柱对克林霉素磷酸酯乳膏供试品溶液、空白溶液进行了测定，由
表 3 及图可知，在上述色谱条件下，克林霉素磷酸酯与相对保留时间约为 0.97 的色谱
峰分离度大于 1.0，与相邻杂质分离度为 1.45。
表 3.克林霉素磷酸酯供试品溶液实验数据
图 1.Venusil® C18 Plus 色谱柱空白辅料供试品溶液高效液相色谱图
图 2.Venusil® C18 Plus 色谱柱克林霉素磷酸酯供试品溶液高效液相色谱图
图 3.Venusil® C18 Plus 色谱柱克林霉素磷酸酯供试品溶液高效液相色谱图(纵坐标局部放大图)
结论
本实验参照中国药典 2015 年版 二部克林霉素磷酸酯有关物质项下检测方法，采用
Venusil® C18 Plus 色谱柱对克林霉素磷酸酯乳膏供试品溶液、空白样品溶液进行了测
定。结果表明在上述实验条件下，空白辅料对主成分无干扰，克林霉素磷酸酯峰可与相
邻杂质峰实现分离。
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