LC/MS/MS 检测血清中类固醇激素
— 背景
类固醇激素又称为甾体激素，是内分泌细胞分泌的高效能生物化学物质。它们在维持生命、调节机体物质代谢、促进性器官发育和维持生育等方面起着重要作用。
类固醇激素在体内的含量较低，对其准确定量具有重要意义。本实验采用 Cleanert® PEP
96 微孔板对血清样品进行净化，建立了血清中类固醇激素的检测方法，该方法适合高通量样品前处理。
二 目标物信息
表 1 化合物结构
三 材料及仪器
Cleanert PEP 96 微孔板(5mg/1mL)；96 孔板正压装置；96 位接收板；Venusil ASB C18
（2.1*50mm，3μm，150 Å）；API 4000+。
四 样品处理方法
4.1 样品预处理
100μL 血清样品与 100μL 含有 1%甲酸的甲醇/水溶液混合（50/50，v/v）
4.2 SPE 过程
活化：依次用 200μL 甲醇、200μL 水活化；
上样：将预处理过的血清样品上样至 96 孔板中；
淋洗：加入 400μL 甲醇/水(35/65, v/v)用于淋洗样品中的干扰物；
洗脱：加入 200μL 1%甲酸甲醇，用 96 位收集板收集洗脱液用于 LC-MS/MS 检测。（将洗脱液氮吹浓缩可获得更低的检测限）
五 仪器检测条件
5.1 HPLC 条件
色谱柱：Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm，150Å） 流速：200μL/min
柱温：30℃ 进样量：3μL
流动相：0.1%甲酸水/0.1%甲酸乙腈（ 40/ 60，v/v）
5.2 质谱条件
扫描模式：电喷雾电离正模式 采集模式：多反应监测（MRM）
表 2 参数信息
六 结果
表 3 加标回收率数据
| 加标浓度 | 醛固酮 | 氢化可的松 | 睾酮 | 脱氢表雄酮 | 黄体酮 |
| 30ppb | 85.9% | 87.0% | 105.5% | 110.6% | 97.7% |
在临床检验中类固醇激素是一个难点。本实验使用Cleanert® PEP 96 孔板提取血清中的类固醇，加快了检测速度，相较免疫法提高了最低检测浓度，回收率高于 85%，可满足实验室检测相关物质的需要。
| 产品名称 | 规格/包装 | 订货号 |
| Cleanert PEP | 96 微孔板，5mg/1mL | PE00501-MW |
| Cleanert M96 生物样品前处理仪 | 与 96 孔板匹配 | SPE-M96 |
| Cleanert V96 氮吹浓缩仪 | 与 96 孔板匹配 | NV-96G |
| 96 位接收板 | 1mL，与 96 孔板匹配 | 96SP1036-Y |
| Venusil ASB C18 | 2.1*50mm，3μm,150 Å | VS930502-0 |
| 甲醇 | HPLC，4*4L | AH230-4 |
| 乙腈 | HPLC，4*4L | AH015-4 |
| 水 | LC-MS 级，4*2.5L/箱 | LC365 |
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