【飞诺美色谱】猪肉中辛基酚等 5 种酚类物质的分析方法

艾杰尔飞诺美

2024/07/04 18:31

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摘要：本实验重现了《BJS201913 食品中辛基酚等 5 种酚类物质的测定方法》，使用 Cleanert

PEP 固相萃取柱结合 LC-MS/MS 对猪肉样品进行了测试。样品经乙腈提取后，Cleanert PEP

固相萃取柱净化，乙腈洗脱，Kinetex EVO C18 液相色谱柱进行检测，自动进样器前连接

Venusil XBP C18 色谱柱作为捕集柱，采用内标法定量。结果表明，当添加水平为 5 µg/kg

和 20 µg/kg 时，5 种酚类物质相对回收率在 80% ~ 120%之间，能够满足检测要求。

关键词：辛基酚；壬基酚；正壬基酚；正辛基酚；双酚 A；Cleanert PEP；Kinetex EVO C18；

Venusil XBP C18；

样品信息

实验部分

仪器、试剂与材料

主要仪器设备

液相色谱串联质谱仪（SCIEX API 4000+ ）；

试剂材料

固相萃取小柱：Cleanert PEP，200 mg/6 mL，使用前用 18 mL 甲醇活化，6 mL

水平衡；

实验用乙腈、水、甲醇均为质谱级试剂；

标准储备溶液（100 mg/L）：分别称取壬基酚、正壬基酚、辛基酚、正辛基

酚和双酚 A 标准物质 10 mg，用甲醇溶解，并转移至 100 mL 容量瓶中，定容至

刻度，标准储备液浓度为 100 mg/L。于-20 ℃冰箱中保存。

混合标准中间溶液（1 mg/L）：分别准确吸取壬基酚、正壬基酚、辛基酚、

正辛基酚和双酚 A 标准储备液 1 mL 至 100 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，

摇匀，制成 1 mg/L 的混合标准中间溶液，置于 4 ℃冰箱中保存。

同位素内标标准储备溶液（100 mg/L）：分别称取壬基酚-13C6、正壬基酚-D4、

对辛基酚-13C6、正辛基酚-D17、双酚 A -D4同位素内标 10 mg，用甲醇溶解，并

转移至 100 mL 容量瓶中，定容至刻度，标准储备液浓度为 100 mg/L。于-20 ℃

冰箱中保存。

同位素内标混合标准中间溶液（1 mg/L）：分别准确吸取壬基酚-13C6、正壬

基酚-D4、对辛基酚-13C6、正辛基酚-D17、双酚 A -D4 同位素内标标准储备液各 1

mL 至 100 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成 1 mg/L 的混合标准中

间溶液，于 4 ℃冰箱中保存。

同位素内标混合标准工作液（100 µg/L）：分别准确吸取同位素内标标准中

间溶液 1 mL 至 10 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成 100 µg /L 的

混合标准工作液。临用时配制。

混合标准工作溶液：分别准确吸取混合标准中间液，加入同位素内标混合标

准中间溶液，使壬基酚、正壬基酚、辛基酚、正辛基酚和双酚 A 浓度分别为 0.5

µg/L、1 µg/L、2 µg/L 、5 µg/L、10 µg/L、20 µg/L 和 50 µg/L 的混合标准系列工

作溶液。临用时配制。

样品基质

实验采用的基质为猪后臀肉，均质后放冰箱冷冻备用。

样品制备

样品提取

称取 1 g 已均质好的样品，置于 50 mL 离心管中，加入同位素内标混合标

准工作溶液 0.1 mL 和 5 mL 乙腈，涡旋混匀 1 min，超声提取 15 min，8000 r/min

离心 5 min，取上层清液；残渣再使用 5 mL 乙腈重复提取一次，合并乙腈相，

置冰箱-20℃冷冻 2 小时，取出于 8000 r/min 离心 5 min，取上清液待净化。

样品净化

将上述待净化液加 30 mL 水稀释，混匀，全部经过预先活化、平衡的 Cleanert

PEP 柱，控制流速为 1 ~ 2 mL/min，弃去滤液，然后使用 12 mL 的 60 %甲醇水

溶液（V/V）淋洗，弃去淋洗液，再用 6 mL 乙腈洗脱，接收洗脱液，于 50℃下

氮吹，控制氮气流量，缓慢氮吹至近干，残渣用 1 mL 甲醇复溶，8000 r/min 离

心 5 min，取上层清液待测。

实验条件

色谱条件

色谱柱：Kinetex EVO C18；(2.6 µm，3.0 × 50mm)；

捕集柱：Venusil XBP C18；(5 µm，4.6 × 50 mm)；

流动相 A：0.05%氨水溶液；

流动相 B：甲醇；

流速：400 µL/min；

柱温：30℃；

进样量：10 µL；

梯度程序：

质谱条件

电喷雾电离负离子模式 (ESI-)；采集方式：多反应监测 (MRM)，离子源温

度：650℃；雾化气压力：55 psi，辅助气压力：65 psi；气帘气压力：20 psi；电

喷雾电压：-4500V。

由表 4 可知，采用 Cleanert PEP 固相萃取柱结合 LC-MS/MS 对猪肉基质中

的 5 种酚类物质进行测试，加标回收率在 80% ~ 120%之间，RSD 均小于 10%，

方法中 5 种酚类物质的检出限为 0.1 µg/kg ~ 1.0 µg/kg（S/N=3），能够满足检测

要求。

实验谱图

结论

本实验使用 Cleanert PEP 固相萃取柱结合 LC-MS/MS 对猪肉样品中的辛基

酚等 5 种酚类物质进行检测。实验表明，加标量为 5 µg/kg、20 µg/kg 时，5 种酚

类物质的回收率在 80% ~ 120%之间，RSD 值均小于 10%，平行性良好，能够满

足实验要求。说明 Cleanert PEP 可用于猪肉中辛基酚等 5 种酚类物质的检测。

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