【飞诺美色谱】吉西他滨及其代谢物的分析方法

艾杰尔飞诺美

2024/09/05 18:20

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概述

本实验以乙酸铵缓冲液（醋酸PH调至5.7）和甲醇为流动相，使用SynergiTM Hydro-RP（3×100mm 2.5μm）色谱柱对吉西他滨及其代谢物dFdU进行测试，峰型良好，分离符合要求。

关键词

SynergiTM Hydro-RP； LC-MS/MS；

化合物信息

实验部分

3.1仪器、试剂与材料

3.1.1主要仪器设备

液相色谱串联质谱仪(AB SCIEX Triple QuadTM5500+)，配有电喷雾离子源(ESI)；

3.1.2试剂材料

实验用水、甲醇均为色谱级，乙酸铵为分析纯。

乙酸铵缓冲液：取3.85g乙酸铵加入800mL水溶解，加冰醋酸调节PH至5.7，混匀；

3.1.3样品

样品：粉末，由客户提供；

标准工作液：精密称取Gem、dFdU各2mg，用 0.5mL甲醇稀释，后吸取100μL、10μL分别于棕色瓶中、用甲醇稀释至1mL。（标准工作液浓度分别为为4000μg/mL、400μg/mL、40μg/mL）

3.2样品前处理方法

称量：准确吸取血浆样品30μL置于2mL微量离心管中，加标；

提取：准确加入400μL 乙腈，涡旋5min。后以 10000r/min，离心5min；

稀释：上清液过0.22μm PTFE/L滤膜后，吸取50 μL上清液，用950μL水稀释配置成上机液。

3.3仪器检测条件

3.3.1色谱条件

色谱柱：SynergiTM Hydro-RP（3×100mm 2.5μ m, 100Å）；P/N:00D-4387-Y0

流动相A：乙酸铵缓冲液（冰醋酸调PH 5.7）；

流动相B：甲醇

流速：0.4 mL/min；

柱温：40 ℃；

进样量：10 μL；

洗脱条件：乙酸铵缓冲液：甲醇=90:10 等度洗脱

3.3.2质谱条件

离子源类型：电喷雾离子源（ESI+）

扫描方式：多反应监测正离子模式（MRM）

喷雾针电压：5500 V

离子源温度：500 ℃

加热器（GS1）：55 psi

辅助加热气（GS2）：55 psi

气帘气（CUR）：25 psi

碰撞气（CAD）：10 psi

为获得较好的稳定和灵敏度，各化合物监测离子对的去簇电压（DP）和碰撞电压（CE），目标化合物定量离子对以及内标监测离子对等参数均经过系统优化，优化信息参见表2。

3.4结果与讨论

讨论

实验尝试了不同稀释倍数，按照原方法的1:2 3 倍稀释，及变更稀释倍数1:9 10倍稀释，0.5:9.5 20倍稀释等，发现吉西他滨及其代谢物受有机相占比影响很大，100μL的有机相会影响出峰时间及峰型，可见下图。只有在低有机相情况下峰型及出峰时间才不会被影响。介于响应值的关系，实验进行了20倍浓度的稀释，可由实验谱图看出50μL有机相比例已经可以进行定量分析。

3.4实验谱图

结论

本实验以乙酸铵缓冲液（醋酸PH调至5.7）和甲醇为流动相，使用SynergiTM Hydro-RP（3×100mm 2.5μm）色谱柱对吉西他滨及其代谢物dFdU进行测试，稀释倍数20倍，峰型良好，分离符合要求。

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