概述
本实验以0.1%甲酸水和乙腈为流动相，使用Kinetex C18 （100×3mm 2.6μm）色谱柱对乳酸链球菌素A和乳酸链 球菌素Z进行测试，峰型可达要求。
关键词
Kinetex C18；乳酸链球菌素A；乳酸链球菌素Z
化合物信息
实验部分
3.1仪器、试剂与材料
3.1.1主要仪器设备
液相色谱串联质谱仪(AB SCIEX API 5500+)，配 有电喷雾离子源(ESI)；
3.1.2试剂材料
实验用水为屈臣氏水；乙腈为色谱纯试剂；甲 酸为分析纯。
3.1.3样品
1. 样品：由客户提供；
2.母液：分别称取1mg乳酸链球菌素A、Z标品 于棕色进样小瓶中，用含0.1%甲酸的20%乙腈水 溶液溶解稀释至1mL配置成母液（1000μg/mL）。
3.上机液：吸取1μL母液于棕色进样小瓶中，用 含0.1%甲酸的20%乙腈水溶液溶解稀释至1mL； 后吸取50μL稀释液，用含0.1%甲酸的20%乙腈水 溶液溶解稀释至1mL，上机（0.05μg/mL）。
3.2仪器检测条件
3.2.1色谱条件
色谱柱：Kinetex C18 100×3mm 2.6μm； P/N：00D-4462-Y0
流动相：A：0.1%甲酸水；
B：乙腈
流 速：0.30 mL/min；
柱 温：30 ℃；
进样量：20μL；
梯度程序见表2：
3.2.2质谱条件
离子源类型：电喷雾离子源（ESI）
扫描方式：多反应监测正离子模式（MRM+）
喷雾针电压：5500 V
离子源温度：500 ℃
加热器（GS1）：55 psi
辅助加热气（GS2）：55 psi
气帘气（CUR）：30 psi
碰撞气（CAD）：10 psi
为获得较好的稳定和灵敏度，各化合物监测离 子对的去簇电压（DP）和碰撞电压（CE），目 标化合物定量离子对参数经过系统优化，优化 信息参见表3。
3.3结果
3.4实验谱图
3.5讨论
查阅文献得知0.1%甲酸水和含有20%乙腈0.1%甲 酸水均可溶解乳酸链球菌素A、Z标品，实验分别尝试了两种溶解方法，由图2、3可知，0.1%甲酸水 （PH 2.65）对乳酸链球菌素Z有很强的抑制作用，含 20%乙腈0.1%甲酸水对乳酸链球菌素A由轻微的抑制作 用，所以实验选用20%乙腈0.1%甲酸水来溶解标品。
实验筛选了Synergi Hydro RP、Biozen Oligo、Kinetex XB C18、Kinetex EVO C18、Kinetex C18及 Biozen dSEC尺寸排阻等色谱柱。由图4~8中可以看 出，Synergi Hydro RP色谱柱对A、Z两种物质分离不 是很好，并且峰型及响应都很差；Biozen dSEC尺寸 排阻色谱柱没有出峰；Kinetex EVO C18和Kinetex XB C18在50ng/mL条件下响应和峰型均没有Kinetex C18 （图1）好。所以在0.1%甲酸水和乙腈流动相条件下，Kinetex C18色谱柱满足实验要求。
结论
本实验以0.1%甲酸水和乙腈为流动相，使用Kinetex C18（100×3mm 2.6μm）色谱柱对乳酸链球菌素A和乳 酸链球菌素Z进行测试，峰型可达要求。
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