概述
mRNA聚集体检测是指使用特定的分析技术来识 别、量化并表征mRNA分子在生产或存储过程中可能 形成的聚集体。mRNA（信使核糖核酸）是一种单链 RNA分子，它携带遗传信息，指导细胞合成特定的蛋 白质。在mRNA疫苗或药物的生产过程中，mRNA分子 可能会因为多种因素（如温度变化、pH值波动、物理 或化学应力等）而形成聚集体。
聚集体的存在可能会影响mRNA的稳定性、活性 以及最终的疫苗或药物效果。因此，检测mRNA聚集 体对于确保产品质量、安全性和有效性至关重要。
本应用采用全新推出的Biozen dSEC-7建立了一种 分析mRNA聚集体的方法，并评估加热处理对聚集体 的影响。通过分子排阻色谱法（SEC）研究人员可以 更好地理解和控制mRNA聚集体的形成，从而优化 mRNA疫苗和药物的生产工艺，提高产品质量。
致谢
本应用特别感谢云舟生物科技（广州）股份有限公司提 供此次样品，云舟生物以其优异的产品和服务，为科研 工作者以及相关企业提供了宝贵的支持，他们提供的样 品不仅质量上乘，而且种类繁多，能够满足不同研究需 求。
关键词
mRNA；dSEC-7；聚集体
实验部分
3.1仪器、试剂与材料
3.1.1主要仪器设备
Agilent1260
3.1.2试剂材料
磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠、Tris、乙酸 钠为分析纯，超纯水
3.1.3样品
EGFP IVT mRNA（998 nt），浓度为1129 ng/μL;
3.2色谱条件
色谱柱：Biozen dSEC-7（4.6×300 mm, 3 μm, 700 Å）；P/N: 00H-4789-E0
流动相：如下所示
流 速：0.3 mL/min
柱 温：30℃；
波 长：260 nm；
上样量：1 μL
梯度方法：等度
3.3结果与讨论
3.3.1不同盐浓度对分离的影响
比较了在相同浓度PB缓冲液下，三种不同氯化 钠浓度对该mRNA聚集体分离的影响，发现并不是盐 浓度越高，分离越好，最优氯化钠浓度为100 mM， 分离度能接近1.5。
3.3.2 不同盐流动相对分离的影响
保持其他条件不变的情况下，对比不同种类盐 对该mRNA聚集体分离的影响，采用的是较低浓度的 Tris加乙酸钠体系和最优磷酸盐体系，发现在不同体 系下，聚集体的形式是不同的，分离度也是有差别 的。
3.3.3不同流速对分离的影响
在15 mMTris+15 mM乙酸钠 PH=7低盐流动相体 系下，优化分离，从表3数据可以看出，当降低流速 时，分离度更好，也能接近1.5。
3.3.4热处理前后对比
当使用70°高温加热mRNA 5min后，mRNA会变 性，聚集体会转变为单体形式，实验发现，当加热 处理后，聚集体响应明显降低的，同时主峰响应明 显增加。
结论
对以上数据分析，结果表明，无论是在常规SEC 分析的磷酸盐体系下，还是较低浓度的Tris缓冲盐 体系，dSEC-7对于大小在1000 nt左右的mRNA样 品聚集体表现出了较好的分离趋势，基本能达到 基线分离，而且在上样量较少的情况下，也能达 到一个很好的响应，原因在于dSEC-7采用了优异 的孔控制技术以及BioTiTM生物惰性硬件。通过该实 验的研究，确定了dSEC-7在分析mRNA分子及其 聚集体场合有很好的实际应用。
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