概述
随着腺病毒作为基因治疗的药物运载载体不断地发展，需要更有效的 分析方法来评估和确保聚集体等腺病毒的关键质量属性 (Critical qual- ity Attributes, CQA) 能符合要求。
测定 AAV 聚集体的金标准方法是分析超速离心法 (Analytical Ultra Cen- trifugation, AUC)。但众所周知，AAV 样品的量本来就非常有限，但 AUC 方法需要大量的 AAV 样品。在需要进行重复实验时，AUC 的局限性使 得分析进一步复杂化，并且利用有限的样品很难兼顾到额外的 CQA 检 测需求。体积排阻色谱法（SEC）是一种广泛应用的聚集体分析技术，并 且已被证明可以作为 AAV 聚集体分析的有效解决方案。
在本文中，我们重点介绍了 BiozendSEC-7 SEC-FL 解决方案，该方案可 以在 10 分钟内进行稳定可靠的AAV聚集体分析，且仅需要 0.5 μL 样品。 为了确定上样量对聚集体和单体间的分离度和聚集体检测的影响，我们 将 4 种不同血清型 (AAV2，5，8，9) 分别以 0.5-2 μL 之间的体积进样 (如 图 1-4)。在所有的进样体积条件下，AAV2 和 AAV8 的单体和聚集体分离 度均 ≥2.0 (如图 1 和 图 3)。在所有的进样体积条件下，AAV5、AAV9 单体 和聚集体分离度均在 1.5 和 2.0 之间。有趣的是，随着上样量从 0.5 μL 增 长到 2.0 μL，AAV9 的分离度从 1.6 增长到 2.0。在所有不同上样量的实 验中，聚集体的含量百分比均保持一致，说明 Biozen dSEC-7 色谱柱于 高灵敏度的荧光检测相结合，可以在上样量低至 0.5 μL 时提供准确的检 测和分离。
LC 方法条件
色谱柱: Biozen 3 µm dSEC-7
规格: 150 x 4.6 mm
货号: 00F-4789-E0
流动相: 20 mM 磷酸钠, pH 6.6 + 350 mM 氯化钾
流速: 350 µL/min (等度)
温度: 25 °C
进样量: 0.5 µm, 1µL, 2 µL
系统 Waters® ACQUITY® H-Class
检测器: FLR - Ex 280 nm, Em 350 nm
进样频率: 40 Hz
样品: 1.AAV2-CAG-GFP, 2E13 vg/mL
2.AAV5-CMV-GFP, 2E13 vg/mL
3.AAV8-CMV-GFP, 2E13 vg/mL
4.AAV9-CMV-GFP, 2E13 vg/mL
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