冠状病毒因为包膜上密布着类似日冕的棘突而得名,属于冠状病毒科,正冠状病毒亚科的冠状病毒属。根据血清学和基因组学特点,该属名代表了α、β、γ和δ四个属。目前已知感染人的冠状病毒包括7种,即α属的普通冠状病毒HCoV?229E和HCoV?OC43,β属的HCoV?NL63、HCoV?HKU1、严重急性呼吸综合征(SARS)-CoV和中东呼吸综合征(MERS)-CoV,以及此次导致武汉不明原因肺炎的新型冠状病毒(2019-nCoV)。其中,HCoV?HKU1、SARS-CoV、MERS-CoV和2019-nCoV可以导致人类肺炎,其他是成人普通感冒的病原,儿童较敏感,可致上呼吸道感染。
早在2008年的《Cell》中,一组来自日本科学家发表了一篇题为《Visualizing spatiotemporal dynamics of multicellular cell-cycle progression》的文章,文中表示:他们得到了两种新型荧光蛋白,其中一种能使得G1期细胞核呈现红色,而另一种使得S/G2/M期细胞核呈现出绿色,研究人员将这些蛋白称为荧光泛素化细胞周期标志物(Fucci)。
细胞接种在加入2μm 青霉素(PEN)的30mm的圆形培养皿中。
免疫染色和LMD按照预定方案*进行,并进行如下修改。
处理结束时,细胞用Hank's平衡盐溶液(HBSS)洗涤2次,每次5分钟,并用2ml乙醇固定5分钟。
在HBSS中洗涤30秒,然后用2ml HBSS /0.1% Saponin加10%驴血清封闭,孵育3分钟。
稀释1:50的N蛋白抗体或1:400的P(S2)-pol II,在含0.1%皂素的400μm Hank’s BSS中37℃孵育。
用Hank’s BSS/0.1%皂素洗涤30秒。
用y3抗体(1:50)和Dylight488二抗(1:400),室温400μl HBSS/0.1% Saponin。
在2 ml HBSS中洗涤3次,每次30秒,然后在2ml DEPC水中洗涤30次,然后在40℃干燥30分钟。
使用Leica LMD6000系统将未感染的细胞和感染的细胞切除并收集在微量离心管中,用荧光显微镜检测。
从病理样本、细胞样本或涂片中,采用激光切割、分离收集特定染色体,细胞,组织,从而进行精准细胞的下游基因组、转录组、蛋白组、或代谢组水平的分析及验证。
可应用于特定的单个染色体、细胞、整个组织区域,甚至骨骼、牙齿、大脑、植物等的切割分离。专利重力非接触收集模式(专利号:DE 10057292, EP 1207392, JP 3641454)精准、无污染。可配备自动高通量切割及收集模式。操作过程中无需移动样品,而是通过专利的激光光束任意扫描切割(专利号:EP 1276586、US 7035004、JP 3996773),灵活又精准。重力收集模式又很好地避免了样品污染。
采用独特的激光设计和易用的动态软件,高达5000 Hz脉冲的349nm,干净、高效的切割目标物边缘,而目标物体无需接触激光,不受影响。
采用普通的0.2或0.5ml离心管即可收集,耗材成本低。
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