SuperLu SCX使用指南

1、运行参数:
pH范围:2.0 ~ 7.0
压力:不得超过3500psi
柱温:不得超过60°C
出厂保存溶剂:0.2M (NH4)H2PO4, pH 3.5
2、新柱开始使用步骤:
连接色谱柱前,先用过滤并脱气处理的HPLC级纯水冲洗整个系统和管路,以去除其中可能存在的有机相,防止连接柱子后盐的析出;
连接色谱柱后,用水相将其中的盐溶液冲洗掉,再用流动相平衡后使用。
3、样品制备:请检查样品在流动相中的溶解性,尽可能采用流动相作为样品稀释溶剂;进样前需使用0.45或0.22μm的滤膜过滤样品。
4、清洗与保存:由于SCX流动相中多使用缓冲盐,使用完需先用纯水冲洗10倍柱体积,再用甲醇冲洗10倍柱体积并最后保存在甲醇中(再次使用前,如流动相中含有缓冲盐,需先用大比例水将甲醇替换掉,再进流动相,避免盐析出)。
5、再生:
一般使用10倍柱体积的下列溶剂依次进行冲洗:
500mM磷酸盐缓冲液,pH 7
10%醋酸水溶液
纯水
甲醇
蛋白去除(用10倍柱体积的下列溶剂依次进行冲洗):

500mM磷酸盐缓冲液,pH 7
10%醋酸水溶液
纯水
5M尿素或5M异硫氰酸胍溶液
纯水
如有压力升高现象,可以对该色谱柱进行反冲。
6、色谱柱测试:
测试混标:尿嘧啶(0.1mg/mL)、胸腺嘧啶(0.3mg/mL)、胞嘧啶(0.6mg/mL)
流动相:0.2M (NH4)2HPO4, pH 3.5;
流速:1 mL/min;
柱温:35℃;
检测器:UV @ 254nm;
进样量:2μL。


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