动物源食品中氯霉素检测的固相萃取方法
(polyclean x-hlb)
一、实验目的
本法为以polyclean x-hlb (60mg/3ml)柱开发的针对动物源食品(禽肉、畜肉和水产品)中氯霉素样本前处理净化方法,hplc法作为检测手段。polyclean x-hlb (60mg/3ml)柱净化效果良好,回收率满足测试要求,重现性好,与知名厂商同型号柱性能相当。
二、实验目标物
氯霉素(cas:56-75-7)
三、应用范围
本方法适用于动物源性食品(禽肉、畜肉和水产品)中残留药物的检测。
四、参考标准
《农业部1025号公告-21-2008动物源食品中氯霉素残留检测气相色谱法》
五、实验材料
nuanalyticalpolycleanx-hlb固相萃取柱60mg/3ml,w品牌hlb固相萃取柱60mg/3ml。
六、实验方法
1、样品待测溶液制备
取5±0.05g猪肉样品,于50ml离心管中,加入20 ml乙酸乙酯混合2min,4000 r/min离心15 min,取上清液于另一离心管中,再用20 ml乙酸乙酯重复提取残渣1次,合并两次提取液,并加入500 μl氨水,于45 ℃旋转蒸发近干,加入500 μl甲醇混合1min,加入10 ml4%nacl涡旋混匀10 s,加入10 ml正己烷摇匀20次,4000r/min离心5 min,弃去上层,再用10 ml正己烷脱脂一次,最后加入500 μl氨水混匀供上柱净化用。
2、活化
依次用2 ml甲醇和2 ml水活化。
3、上样和洗脱
取上述备用液重力作用下过柱依次用2 ml水、1 ml甲醇/乙腈/水/氨水(15:15:65:5, v/
v)淋洗上样柱并抽干,最后用2 ml 5%氨化甲醇溶液洗脱柱子上的待测成分。
4、重新溶解
收集洗脱液,于45℃氮气吹干,准确加入1.0 ml甲醇/水(4:6,v/v)溶液溶解残余物混匀,0.22 μm滤膜过滤,供hplc测定。
5、hplc条件
色谱柱:superlu c18 (250×4.6 mm,5 μm)
检测器:uv@278 nm
流动相:a:水 b:甲醇
洗脱方式:等度洗脱,a:b=60:40
柱温:30℃
流速:1.0ml/min
进样量:20μl
七、实验结果
1、添加水平为0.5 mg/kg猪肉基质中氯霉素(cap)的添加回收结果
表1 添加水平为 0.5 mg/kg 猪肉基质中氯霉素(cap)的添加回收结果
名称 | 回收率(%) | 平均回收率(%) | rsd(%) |
1 | 2 | 3 |
氯霉素 | 92.6 | 89 | 87 | 89.5 | 3.2 |
表 2 w 品牌同型号柱,添加水平为 0.5 mg/kg 猪肉基质中氯霉素(cap)的添加回收结果
名称 | 回收率(%) | 平均回收率(%) |
|
1 | 2 |
|
氯霉素 | 90.8 | 91.4 | 91.1 |
2、添加水平为 0.5mg/kg 猪肉基质中氯霉素(cap)检测色谱图
1 添加水平为0.5mg/kg猪肉基质中氯霉素(cap)检测色谱图