方案摘要
方案下载应用领域 | 食品/农产品 |
检测样本 | 畜禽肉及副产品 |
检测项目 | |
参考标准 | GB 31658.7-2021 |
本文参考GB 31658.7-2021《食品安全国家标准 动物性食品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌酮和雌酮残留量的测定 气相色谱-质谱法》,使用气相色谱-质谱联用仪检测猪肉中的17β-雌二醇、雌三醇、炔雌酮和雌酮残留量,通过检出限、精密度和准确度等指标评估仪器性能,证明GCMS 1000满足检测的需要。
前言
17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮均为雌激素类,常在动物性食品中添加使用。畜禽食用含有激素的饲料后,这些激素会沉积在畜禽的肉和内脏中,人食用含有大量激素的畜禽产品后,常常会出现心动过速、心慌、手颤、头晕、头痛等神经中枢调节紊乱的现象,尤其对高血压、心脏病、糖尿病、甲状腺功能亢进、前列腺肥大患者危险性更大。同时影响生殖系统,导致性发育提前,食用激素含量高的畜禽产品可使体内雌激素增高,可能致使男性乳房女性化发育。一些激素还易引起性发育提前和各种肿瘤,如卵巢肿瘤、肾脏腺肿瘤等。
本文参考GB 31658.7-2021《食品安全国家标准 动物性食品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌酮和雌酮残留量的测定 气相色谱-质谱法》,使用气相色谱-质谱联用仪检测猪肉中的17β-雌二醇、雌三醇、炔雌酮和雌酮残留量,通过检出限、精密度和准确度等指标评估仪器性能,证明GCMS 1000满足检测的需要。
实验部分
样品前处理
取试样5 g于50 mL离心管,加醋酸钠缓冲液10 mL,均质1 min,涡旋振荡2 min,加葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶20 uL,50℃酶解2 h,加乙酸乙酯20 mL,涡旋振荡3 min,10000 r/min离心5 min,收集上清液于100 mL鸡心瓶中,残渣中加乙酸乙酯20 mL,重复提取1次,合并上清液,40 ℃平行浓缩仪蒸发至近干,用氢氧化钠溶液6 mL分3次溶解洗涤鸡心瓶,洗液转入50 mL离心管中,加正己烷20 mL,涡旋振荡1 min,10000 r/min离心5 min,收集下层清液,加醋酸铵溶液1mL,用冰醋酸调pH至5.0~5.2,备用。取C18固相萃取柱,依次用甲醇、水各5mL活化。取备用液,过柱,分别用水、甲醇水溶液各5 mL淋洗,抽干,加甲醇5 mL洗脱,收集洗脱液,50 ℃水浴氮气吹干。加乙酸乙酯正己烷溶液5 mL使溶解,备用;取硅胶固相萃取柱,加正己烷5 mL活化,取备用液过柱,淋洗,抽干,加乙腈5 mL,洗脱,收集洗脱液,50℃水浴氮气吹干。加入甲苯、衍生化试剂各100 μL于吹干玻璃管中,混合均匀,封口于80 ℃烘箱衍生60 min,冷却后加入300 μL甲苯,混匀,供GCMS测定。
仪器条件
表1.仪器方法参数
模块 | 参数 | 值 |
色谱 | 进样口温度 | 220 °C |
进样方式 | 不分流 | |
色谱柱系统 | DB-5ms(30 m×0.25 mm×0.25 µm) | |
升温程序 | 起始温度100°C,保持1min,以20°C/min升至200 °C,保持3min;20°C/min升至260 °C,保持5min;再以20°C/min升至280 °C,保持3min | |
载气 | 氦气 | |
柱流量 | 1 mL/min 恒流模式 | |
质谱 | 离子源 | EI,70eV |
离子源温度 | 230 °C | |
接口温度 | 280 °C | |
检测器电压 | -1500 V | |
采集速率 | 1000 amu/s | |
溶剂延迟 | 16 min | |
采集模式 | 选择离子(SIM) |
结果与讨论
1、标准谱图和物质信息
实验总离子流图见图1,17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮加标浓度均为1000 μg/L。17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮出峰顺序、保留时间以及特征离子信息见表2。
图1 17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮衍生物总离子流图
表2. 17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮保留时间和特征离子信息表
序号 | 名 称 | CAS | RT,min | 定量离子 m/z | 定性离子 m/z |
1 | 雌酮 | 200-164-5 | 17.44 | 414 | 399,309,231 |
2 | 17β-雌二醇 | 50-28-2 | 17.68 | 416 | 232,285,326 |
3 | 炔雌酮 | 57-63-6 | 18.97 | 425 | 285,300,440 |
4 | 雌三醇 | 50-27-1 | 20.05 | 504 | 311,345,414 |
2、标准曲线
取17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮适量,用甲醇稀释成浓度分别为10 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L、500 μg/L、1000 μg/L系列标准溶液,各量取500 μL加入氮吹玻璃试管中,50 ℃水浴氮气吹干,在吹干玻璃管中加入甲苯、衍生化试剂各100 μL,震荡混合,于80 ℃烘箱衍生60 min冷却后加入300 μL甲苯混匀后进行分析。17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮的线性相关系数R2均大于0.990。
(a)雌酮 | (b) 17β-雌二醇 | (c) 炔雌醇 | (d)雌三醇 |
图2 17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮标准曲线图
3、加标回收实验
3.1 精密度和准确度
分别对5 g猪肉进行加标实验,最终定容后加标浓度为10 μg/L、100 μg/L、500 μg/L,各六次平行实验,对精密度和准确度进行评估,准确度具体信息详见下表3。目标物浓度为10 μg/L的目标物的相对标准偏差(RSD)在8.5%-14.6%范围内,17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮浓度为100 μg/L和500 μg/L时,RSD分别在7.1%-8.9%和1.1%-1.8%范围内;回收率分别为61.2%-90.8%、60.7%-75.9%、65.3%-106.8%。
表3.猪肉加标回收率
序号 | 化合物 | 加标浓度(μg/L) | ||
10 | 100 | 500 | ||
1 | 雌酮 | 90.8% | 75.9% | 106.8% |
2 | 17β-雌二醇 | 61.4% | 61.3% | 78.7% |
3 | 炔雌酮 | 75.2% | 70.1% | 78.9% |
4 | 雌三醇 | 61.2% | 60.7% | 65.3% |
3.2 检出限
方法GB31658.7-2021《食品安全国家标准 动物性食品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌酮和雌酮残留量的测定 气相色谱-质谱法》建议对5 g猪肉进行前处理,并最终定容至0.5 mL。测定平行加标样品7次,计算标准偏差(SD),根据方法检出限MDL=t(n-1,0.99)×SD计算各目标化合物的方法检出限。结果如下表4所示,计算可知,17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮方法检出限范围为0.2 μg/L-0.3 μg/L。
表4. 17β-雌二醇、雌三醇、炔雌酮和雌酮方法检出限
序号 | 化合物 | 实测方法检出限 (μg/kg) | 标准要求方法检出限 (μg/kg) |
1 | 雌酮 | 0.2 | 0.5 |
2 | 17β-雌二醇 | 0.3 | 0.5 |
3 | 炔雌醇 | 0.2 | 0.5 |
4 | 雌三醇 | 0.3 | 0.5 |
结论
本文依据GB31658.7-2021《食品安全国家标准 动物性食品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌酮和雌酮残留量的测定 气相色谱-质谱法》,采用禾信GCMS 1000分析了猪肉基质中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌酮和雌酮残。结果显示:17β-雌二醇、雌三醇、炔雌酮和雌酮残的线性相关系数R2均大于0.990;RSD在1.1%-14.6%范围,优于标准要求的RSD≤15%;猪肉中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌酮和雌酮残的加标回收率在60.7%-106.8%范围,满足标准要求回收率(60%-110%);方法检出限在0.2 μg/kg-0.3 μg/kg范围,满足标准要求的检出限0.5 μg/kg。上述结果表明禾信GCMS 1000具有优异的重现性和检测灵敏度。
参考文献
1. GB31658.7-2021《食品安全国家标准 动物性食品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌酮和雌酮残留量的测定 气相色谱-质谱法
全二维分析系统GGT 0620结合化学计量学方法鉴别新会陈皮
动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类检测
分析果蔬中208种农药
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